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上海中医药大学吴高松获国家专利权

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龙图腾网获悉上海中医药大学申请的专利一种基于血小板蛋白超滤亲和质谱的抗血小板活性成分筛选方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119595795B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-10发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411823393.6,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权一种基于血小板蛋白超滤亲和质谱的抗血小板活性成分筛选方法是由吴高松;张榆浩;胡亮;廖景瑜;谢佳设计研发完成,并于2024-12-11向国家知识产权局提交的专利申请。

一种基于血小板蛋白超滤亲和质谱的抗血小板活性成分筛选方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种基于血小板蛋白超滤亲和质谱的抗血小板活性成分筛选方法,首先配置含有目标化合物的供试溶液;然后从血液样本中提取血小板蛋白溶液;接着将供试溶液与血小板蛋白溶液混合后进行共孵育操作;随后通过超滤管洗脱获得血小板蛋白与供试溶液中潜在亲和成分的聚合物;然后通过有机溶剂解离血小板蛋白获得潜在活性成分溶液;进一步的对所获取的对照溶液和潜在活性成分溶液进行质谱检测;随后进行单维统计分析进行活性成分的筛选和鉴定。最后,本发明还挑选了潜在活性成分中代表性成分进行血小板聚集实验验证。本发明能高通量的筛选中药等复杂体系中的抗血小板活性成分。

本发明授权一种基于血小板蛋白超滤亲和质谱的抗血小板活性成分筛选方法在权利要求书中公布了:1.一种基于血小板蛋白超滤亲和质谱的抗血小板活性成分筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、配制含有目标化合物的供试溶液;S2、从血液样本中提取血小板蛋白溶液;S3、使用S1供试溶液与S2血小板蛋白溶液共孵育;S4、使用超滤管对S3中的共孵育溶液进行洗脱,从而获取血小板蛋白与供试熔液中血小板蛋白亲和小分子的聚合物;S5、将S4中的小分子与血小板蛋白聚合物进行解离获得潜在活性成分溶液;S6、使用LC-MS检测S5中解离后的小分子;S7、通过单维统计分析对照组与血小板蛋白亲和组数据来筛选S6中获取的质谱数据,从而筛选供试溶液中与血小板蛋白亲和的小分子,也就是潜在抗血小板活性成分;S8、血小板聚集实验对S7中潜在抗血小板活性成分进行体外验证;步骤S1具体如下:采用缓冲液,对提取的目标样品进行复溶,所述的缓冲液中含有25mMTris-HCl、150mMNaCl、1mM二硫苏糖醇和10mMMgCl2,提取目标样品中成分,并挥干溶剂,获得供试溶液备用;步骤S2具体如下:1)全血提取:取SD大鼠用质量百分比浓度为2%的戊巴比妥钠麻醉,进行SD大鼠的腹主动脉取血,将全血置于含质量百分比浓度为5%乙二胺四乙酸的离心管中;2)富血小板血浆提取:将以质量百分比浓度为5%乙二胺四乙酸抗凝的血液样品在室温下,离心,离心后上层为富血小板的血浆,下层沉淀的白细胞和红细胞;3)血小板提取:将富血小板血浆转入新的离心管,离心,弃去上层血浆,沉淀纯血小板;4)血小板蛋白提取:将纯血小板重新悬浮于缓冲液中,加入质量百分比浓度为1%的苯甲磺酰氟蛋白酶抑制剂,超声破裂后,得血小板蛋白混悬液备用;步骤S3具体如下:取血小板蛋白混悬液与供试溶液按照体积百分比1:1混合,于37℃孵育;步骤S4具体如下:1)超滤管准备:采用10kDa超滤管,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷10分钟;2)孵育溶液加入超滤管:冰上操作,将水倒出,将上述S3的孵育溶液加入到10kDa超滤管;3)离心和洗涤:将10kDa超滤离心管与孵育溶液在4℃下离心,停止离心后用50mM醋酸铵溶液洗涤混合物后离心;步骤S5具体如下:将S4的混合物转移到新的EP管中,使用甲醇将与血小板蛋白结合的化合物进行提取,随后在4℃下离心,弃去蛋白质沉淀,使用氮气流吹干浓缩,复溶待测;步骤S7具体如下:使用ProgenesisQI分析软件进行单维统计分析后,筛选对照组与血小板蛋白亲和组之间的差异离子,从而获取潜在的抗血小板活性成分。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人上海中医药大学,其通讯地址为:201203 上海市浦东新区蔡伦路1200号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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