恭喜江苏省苏微微生物研究有限公司;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心杨婷婷获国家专利权
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龙图腾网恭喜江苏省苏微微生物研究有限公司;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心申请的专利用于抗生素恩诺沙星和环丙沙星同步检测的抗体-荧光纳米微球偶合物及其制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116027021B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-10发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310130206.5,技术领域涉及:G01N33/53;该发明授权用于抗生素恩诺沙星和环丙沙星同步检测的抗体-荧光纳米微球偶合物及其制备方法是由杨婷婷;张海涛;王新池;宋超;孟顺龙;祁苏娴;范立民;王红连;裘丽萍;匡群设计研发完成,并于2023-02-17向国家知识产权局提交的专利申请。
本用于抗生素恩诺沙星和环丙沙星同步检测的抗体-荧光纳米微球偶合物及其制备方法在说明书摘要公布了:用于抗生素恩诺沙星和环丙沙星同步检测的抗体‑荧光纳米微球偶合物及其制备方法,步骤如下:将聚苯乙烯微球通过水解的方式在表面上进行羧基化修饰,再利用包埋的方式,将稀土铕元素包埋在微球内部形成聚苯乙烯微球与铕元素的联合体得到荧光微球;构建荧光微球的预处理体系,对荧光微球进行清洗和活化;荧光微球与抗恩诺沙星或抗环丙沙星单克隆抗体进行偶联;制备完成的产品2~8℃避光保存。利用本发明所述方法制备出来的偶合物不仅能够实现目标抗生素检测灵敏度的大幅度提升,更能够完全屏蔽两种抗生素在同步检测时的交叉性,解决了现有技术中恩诺沙星和环丙沙星的检测需要对两个指标分别进行检测既费工又费钱的问题。
本发明授权用于抗生素恩诺沙星和环丙沙星同步检测的抗体-荧光纳米微球偶合物及其制备方法在权利要求书中公布了:1.用于抗生素恩诺沙星和环丙沙星同步检测的抗体-荧光纳米微球偶合物的制备方法,其特征在于,步骤如下:步骤一.制备荧光微球,将粒径为100~500nm的聚苯乙烯微球通过水解的方式在表面上进行羧基化修饰,再利用包埋的方式,将稀土铕元素包埋在微球内部形成聚苯乙烯微球与铕元素的联合体得到荧光微球,所述水解和包埋的具体过程如下:向玻璃容器中依次加入聚苯乙烯微球25mgmL、十二烷基磺酸钠7mgmL、过硫酸钾15mgmL,用去离子水溶解,超声混合均匀,总体积为20mL,然后加入甲醇1.5mL,十一烯酸1.0mL,混匀;通氮气,密封,放入70℃恒温水浴箱中振荡反应4h,反应结束后将微球离心,醇洗、水洗各三次,真空干燥保存得到羧基化聚苯乙烯微球;取上述过程中制备的羧基化聚苯乙烯微球0.1g,加入10mL体积比为1:1的去离子水和丙酮混合液,于28℃振荡10h,然后加入0.5mL0.25M三氯化铕-乙醇溶液,28℃振荡反应20h,最后通过旋转蒸发除去有机溶剂,产物经5000~10000rmin离心分离3min,用去离子水和乙醇淋洗3次,最后用含有0.05wt%叠氮钠的水复溶4℃保存即得到荧光微球;步骤二.构建荧光微球的预处理体系,对荧光微球进行清洗和活化,清洗时,将100μL的荧光微球移至离心管中,并加入400~900μL清洗溶液,功率300W和频率40KHz条件下超声混匀5~10min,结束后,5000~20000rmin的速度离心10~20min去除上清液,再加入400~900μL清洗溶液至离心管中,功率300W和频率40KHz条件下超声混匀5~8min,随后进行活化,将清洗步骤得到的离心管中分别加入20~100μL活化溶液,涡旋混匀,置于混匀器上室温旋转孵育20~40min,得到盛有活化后的荧光微球离心管;步骤三.荧光微球与抗体进行偶联,将盛有活化后的荧光微球离心管在5000~20000rmin转速下进行离心10~20min,去除上清液,重复2遍上述清洗步骤后,加入400~900μL微球偶联缓冲液,超声混匀5~10min,然后加入0.05~0.1mg抗恩诺沙星或抗环丙沙星单克隆抗体,涡旋混匀,置于混匀器上室温旋转孵育1~2h,结束后,5000~20000rmin的速度离心10~20min,去除上清液,随后加入1mL微球封闭液,置于混匀器上室温旋转孵育1~2h,结束后,5000~20000rmin的速度离心10~20min,去除上清液,沉淀重复前述步骤用微球封闭液再清洗一次,然后,加入1~2mL的微球悬浮液,混合均匀,功率300W和频率40KHz条件下超声波分散5min,至此,荧光微球与抗恩诺沙星单克隆抗体或抗环丙沙星单克隆抗体的偶联完成,分别制备得到恩诺沙星抗体-荧光微球偶合物和环丙沙星抗体-荧光微球偶合物;步骤四.制备完成的产品2~8℃避光保存,其中,恩诺沙星抗体-荧光微球偶合物和环丙沙星抗体-荧光微球偶合物同步检测时,不存在交叉反应。
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