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龙图腾网恭喜长春西诺生物科技有限公司申请的专利一种从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115109142B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210942770.2，技术领域涉及：C07K14/75；该发明授权一种从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方法是由夏振强;崔玉梅;刘伟;石晶;张馨月;蒋凡;姜旭;关威;付玉;陈宪平;赵健设计研发完成，并于2022-08-08向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方法，首先通过凝胶柱层析、阴离子柱层析两种方法进行粗分离和细分离，然后分别经DEAESephadexA‑50凝胶吸附进一步纯化，通过多步工艺及其参数的组合，进而同时从犬血浆中提取出高纯度、高收率的犬纤维蛋白原和凝血酶原等多种成分，犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的纯度均可达95％以上，犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的提取率分别达到90％以上和85％以上，大大提升犬血浆的综合利用率；同时，通过调整稳定剂配方和配比，犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的冻干成品溶解性良好，溶液澄清，复溶时间短，分别为10～15分钟和5～10分钟。综上，本发明的方法，工艺稳定，原料利用率高，产品质量好。

本发明授权一种从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方法在权利要求书中公布了：1.一种从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、冷沉淀：将新鲜的冰冻血浆融化，在0℃~5℃条件下16000rmin离心，收集上清液并升温至4℃~8℃，用0.22µm滤芯过滤，取上清液，备用； S2、灭活：取步骤S1的上清液用SD灭活，步骤S1上清液中加入Tween80至1.0%，TNBP至0.3%，搅匀后升温至24~26℃，保温6-8小时，然后0.45µm滤芯过滤，收集滤液； S3、向步骤S2中的滤液加入已平衡好的DEAE-Sephadex-A50凝胶进行吸附，每L上清液中加入量为0.5g-2.0g，混匀，吸附50-80分钟；吸附结束后分别收集液体和凝胶； S4、步骤S3收集的凝胶用2-3倍凝胶体积量的平衡液1洗涤凝胶2-4次，收集流穿液，与步骤S3收集的液体合并，备用，用于制备犬纤维蛋白原；用1-3倍凝胶体积量的洗脱液1洗脱凝胶3-5次，收集洗脱液，用于制备凝血酶原复合物； S5、将步骤S4收集的合并液体浓缩，定为浓缩液1，其蛋白质含量为2-3mgml；将收集的洗脱液浓缩，定为浓缩液2，其蛋白质含量为2-3mgml； S6、阴离子交换柱先用平衡液2充分平衡，然后将浓缩液1上柱子，上柱过程中，流速控制在30-40mlh，收集流穿液；上柱结束后，用2-3倍平衡液2洗涤柱子2-4次，洗涤液与流穿液合并，备用，用于制备纤维蛋白原；将合并液用0.45µm滤芯过滤，收集滤液，滤液按S7A~S10A步骤操作； 另取阴离子交换柱先用平衡液2充分平衡，然后将浓缩液2上柱子，上柱过程中，流速控制在30-40mlh，上柱结束后，用1-3倍洗脱液2洗脱柱子3-5次，收集洗脱液，备用，用于制备凝血酶原复合物；将洗脱液用0.45µm滤芯过滤，收集滤液，滤液按S7B~S10B步骤操作； S7A、步骤S6收集的合并液用凝胶介质为DEAE-Sephadex-A50进行吸附； S8A、凝胶上柱前用平衡液1平衡，上样吸附，上样速度为30-40mlh，上样结束后，用2-3倍凝胶体积的平衡液1洗涤凝胶柱2-4次，收集流穿液与洗涤液混合均匀； S9A、将S8A的混合液用30KD超滤膜超滤浓缩至蛋白质含量为53mgml，加入甘氨酸、蔗糖、吐温80和氯化钠作为稳定剂，使甘氨酸终浓度为1%~2%、蔗糖终浓度为4%~6%、吐温80终浓度为0.01%~0.02%、氯化钠终浓度为0.6%~0.9%； S10A、将步骤S9A的液体除菌过滤、分装、冻干、轧盖，采用干热病毒灭活，得到犬纤维蛋白原； S7B、步骤S6收集的洗脱液用凝胶介质为DEAE-Sephadex-A50进行吸附； S8B、凝胶上柱前用平衡液1平衡，上样吸附，上样速度为30-40mlh，上样结束后，用1-3倍凝胶体积的洗脱液1洗脱凝胶柱3-5次，收集洗脱液； S9B、将S8B的洗脱液用10KD超滤膜超滤浓缩，使凝血因子Ⅸ、Ⅱ、Ⅹ的效价不低于200IUml，凝血因子Ⅶ的效价不低于50IUml，然后加入甘氨酸、蔗糖和吐温80作为稳定剂，使甘氨酸终浓度为1%~2%、蔗糖终浓度为4%~6%、吐温80终浓度为0.01%~0.02%； S10B、将步骤S9B的液体除菌过滤、分装，冻干、轧盖，采用干热病毒灭活，得到凝血酶原复合物； 所述平衡液1为含有50-100mM氯化钠的10-20mM枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，pH为6.5-7.5； 所述洗脱液1为含有400-600mM氯化钠的10-20mM枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，pH为6.5-7.5； 所述平衡液2为含有0.01M-0.02MTRIS、10-20mM的枸橼酸-枸橼酸钠、0.1M-0.3M精氨酸盐酸盐，其余为水，pH为6.5-7.5；阴离子交换柱选择CaptoDAEA或CaptoQ； 所述洗脱液2为含有0.01M-0.02MTRIS、10-20mM的枸橼酸-枸橼酸钠、400mM-600mM氯化钠，其余为水，pH为6.50-7.50。

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