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龙图腾网恭喜中南民族大学申请的专利一种基于G4-ThT生物传感器和NASBA的猪瘟病毒检测方法及其试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114875176B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210325615.6，技术领域涉及：C12Q1/70；该发明授权一种基于G4-ThT生物传感器和NASBA的猪瘟病毒检测方法及其试剂盒是由王毅;贾国帅;徐筱萌设计研发完成，并于2022-03-29向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于G4-ThT生物传感器和NASBA的猪瘟病毒检测方法及其试剂盒在说明书摘要公布了：本发明属于基因工程技术领域，特别是一种基于G4‑ThT生物传感器和NASBA的猪瘟病毒检测方法及其试剂盒，具体方法包括以从猪瘟病毒样品中提取的病毒RNA为扩增对象、采用等温核酸扩增技术进行等温扩增、然后加入含有Tris‑HCl和KCl的缓冲液，再加硫黄素T促进扩增产物上的G‑四链体折叠并形成复合物、在特定波长的光源激发条件下检测荧光并根据其强弱进行判断。本发明提供了一种不需要特殊的生物素标记或巯基修饰处理的探针、检测成本明显降低的检测方法及试剂盒。

本发明授权一种基于G4-ThT生物传感器和NASBA的猪瘟病毒检测方法及其试剂盒在权利要求书中公布了：1.一种基于G4-ThT生物传感器和NASBA的猪瘟病毒检测方法，其特征在于：以从猪瘟病毒样品中提取的病毒RNA为扩增对象，采用等温核酸扩增技术，利用逆转录酶AMV、核糖核酸酶H及T7RNA聚合酶进行等温扩增，产生大量单链RNA扩增产物；然后加入含有Tris-HCl和KCl的缓冲液，再加硫黄素T促进扩增产物上的G-四链体折叠并形成复合物，再对扩增产物以425nm波长的光源激发并检测490nm波长处发射的荧光，根据荧光的强弱进行判断； 具体步骤为： 步骤1.NASBA扩增：将纯化好的的猪瘟病毒RNA样品加入到NASBA反应缓冲液体系，体系中包含50mMTrisHClpH8.5，10mMMgCl2，90mMKCl，10mMDTT，每种dNTP1mM，每种NTP2mM，10％vvDMSO，0.4μMNASBA正向引物和0.4μMNASBA反向引物，反应步骤为加入2μL靶RNA，混合物在65℃温育5分钟以解开靶RNA的二级结构，然后将反应混合物转移至41℃退火5min，再向管中加入5.6μL酶混合物，所述酶混合物包含4mMDTT，2μgBSA，30UT7RNA聚合酶，6UAMV-Rt，0.1URNaseH，得到终体积为25μL，将混合物进一步在41℃温育2小时以进行靶RNA的等温扩增；所述正向引物为E2F-GG29：CCCCTACCTCCCGCCCCTACCCGTCCCCC-CACCACCTGGAAAGAA；所述反向引物为E2R-T7：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGAGATACCTCCTACTGACCA； 步骤2.G-四链体荧光检测反应：取G-四链体扩增产物荧光检测反应缓冲液，反应缓冲液的组成包括50mM的Tris-HCl，pH7.0和50mM的氯化钾，加无菌双蒸水补足为72μl，加入NASBA反应后溶液25μL，然后85℃变性3min后降至室温；加入100μM硫黄素T溶液3μL，然后将溶液转移到96孔酶标板中，将酶标板放入酶标仪或荧光光度计，以425nm波长的光源激发，检测490nm波长处发射的荧光，检测到的荧光强度高于1.0×106RFU即判断为猪瘟病毒阳性。

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