恭喜北京理工大学王帅获国家专利权
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龙图腾网恭喜北京理工大学申请的专利基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法及系统获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119913189B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510414817.1,技术领域涉及:C12N15/81;该发明授权基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法及系统是由王帅;王颖;姜尧竹;孟栋;那雪梅;冯镁琳;李嘉龙设计研发完成,并于2025-04-03向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法及系统在说明书摘要公布了:本发明提供一种基于CRISPR‑Cas9的基因编辑方法及系统,通过构建gRNA表达载体和Cas9表达载体;将gRNA表达载体和Cas9表达载体以及预设供体模板同时导入目标细胞,形成Cas9‑gRNA复合物,当复合物成功结合到目标DNA序列后,在目标DNA序列附近产生双链断裂;利用修复机制,对双链断裂进行修复;其中:若突变位点位于PAM区域上游,则供体模板包含突变位点与PAM区域之间的所有碱基的同义突变;若突变位点位于PAM区域下游,则供体模板包含gRNA互补区域与突变位点之间的所有碱基的同义突变,实现了对目标基因位点的精确编辑,并且增加了与原始基因组不同的碱基数量,提升编辑窗口。
本发明授权基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法及系统在权利要求书中公布了:1.一种基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法,其特征在于,包括: 构建gRNA表达载体和Cas9表达载体; 将所述gRNA表达载体和所述Cas9表达载体以及预设供体模板同时导入目标细胞,以在所述目标细胞内形成Cas9-gRNA复合物,所述Cas9-gRNA复合物在所述目标细胞内搜索与gRNA互补的目标DNA序列; 当所述Cas9-gRNA复合物成功结合到所述目标DNA序列后,Cas9在目标DNA序列附近产生双链断裂; 利用同源重组定向修复机制,通过所述预设供体模板对双链断裂进行修复;其中:若所述目标DNA序列的突变位点位于PAM区域上游,则所述预设供体模板包含所述突变位点与PAM区域之间的所有碱基的同义突变;若所述突变位点位于PAM区域下游,则所述预设供体模板包含gRNA互补区域与所述突变位点之间的所有碱基的同义突变; 所述修复的步骤包括: 在第一轮编辑中,使用第一供体模板,其包含所述突变位点的目标突变以及所述同义突变;利用Cas9核酸酶诱导基因组双链断裂,供体修复时将目标突变碱基与PAM区域之间除非目标碱基外的所有碱基进行同义突变; 在第二轮编辑中,使用第二供体模板,其仅含有所述目标突变,且所述同义突变的区域恢复为原始基因组序列;新供体DNA仅针对目标突变碱基进行特定碱基替换,其余部分与原始基因组序列相同,使得修复后非目标突变氨基酸恢复为原始基因组序列。
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