英科隆生物技术(杭州)有限公司闵丹获国家专利权
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龙图腾网获悉英科隆生物技术(杭州)有限公司申请的专利一种抗原的纯化和复性方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119569842B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510140115.9,技术领域涉及:C07K14/435;该发明授权一种抗原的纯化和复性方法是由闵丹;卢承会设计研发完成,并于2025-02-08向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种抗原的纯化和复性方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种抗原的纯化和复性方法,通过改进其复性剂配方,并改进纯化和复性的工艺路线,在变性后先完成层析柱纯化再进行复性,并在平衡缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液和复性剂中都含有聚乙二醇和胱氨酸,解决重组蛋白复性后容易聚集沉淀的问题,其中针对稳定性较弱的重组蛋白,还添加了CHAPS来提高复性效果,制备的重组蛋白更加稳定,防止聚集沉淀,得率高,并具有好的免疫活性,提高用于检测抗体时的检测灵敏度。
本发明授权一种抗原的纯化和复性方法在权利要求书中公布了:1.一种提高Derf3抗体检测灵敏度的尘螨抗原Derf3的纯化与复性方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)收集含有重组蛋白的发酵培养基,加入变性剂进行变性和溶解; (2)层析柱纯化,所述层析柱先用平衡缓冲液进行平衡,再用洗脱缓冲液进行洗脱; (3)用复性剂稀释、透析,获得重组抗原; 所述平衡缓冲液由0.2%聚乙二醇、0.2%胱氨酸、10mMPBS、10mM咪唑和5%甘油组成;所述洗脱缓冲液由0.2%聚乙二醇、0.2%胱氨酸、10mMPBS、250mM咪唑和5%甘油组成;所述复性剂由0.2%聚乙二醇、0.2%胱氨酸、0.2%CHAPS、10mMPBS、10mM咪唑和5%甘油组成; 步骤(2)所述层析柱为Ni-NTA琼脂糖层析柱;还包括用于洗涤层析柱的洗涤缓冲液,所述洗涤缓冲液由0.2%聚乙二醇、0.2%胱氨酸、10mMPBS、20mM咪唑和5%甘油组成; 所述Derf3重组抗原的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。
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