天津松果生物医疗科技有限公司刘建剑获国家专利权
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龙图腾网获悉天津松果生物医疗科技有限公司申请的专利一种天然活性胶原蛋白提取纯化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119306820B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411871269.7,技术领域涉及:C07K14/78;该发明授权一种天然活性胶原蛋白提取纯化方法是由刘建剑;陈敬华;周娟;付磊;魏永泽设计研发完成,并于2024-12-18向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种天然活性胶原蛋白提取纯化方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种天然活性胶原蛋白提取纯化方法,具体涉及一种纯化Ⅰ型胶原蛋白的方法,属于胶原蛋白生产技术领域。本发明采用盐析、超滤纯化换液的纯化方案,能够成功获得高纯度,高活性的天然Ⅰ型胶原蛋白,改善了传统纯化技术中胶原蛋白纯化周期长、非目的蛋白含量高从而引起的生物活性低、蛋白纯度低的问题。该纯化Ⅰ型胶原蛋白的方法主要包括:S1:原料经前处理后,采用酶解技术反应,而后通过离心的方法获得Ⅰ型胶原酶解液;S2:利用盐析工艺初步除去可溶性杂蛋白及胃蛋白酶等杂质;S3:将粗提取物复溶,通过聚丙烯折叠滤芯过滤获得原料液,将原料液通过切向流超滤的方法进行纯化、浓缩获得Ⅰ型胶原蛋白纯化液。
本发明授权一种天然活性胶原蛋白提取纯化方法在权利要求书中公布了:1.一种天然活性胶原蛋白提取纯化方法,其特征在于,包括如下步骤: S1:选取新鲜的具有动物检疫合格证明且富含Ⅰ型胶原蛋白的动物组织,进行冷冻、切片,经清洗、灭菌、脱脂处理后进行匀浆破碎,匀浆破碎后的组织再次进行脱脂、去糖处理,后经高速离心获取跟腱纤维,接着采用酸性溶液和蛋白酶相结合的方法在温和酶解条件下进行胶原提取,提取完毕使用氢氧化钠溶液调节酶解液pH=5,析出物为未完全匀浆破碎后未被酶解的跟腱纤维,后经高速离心获取酶解上清液; S2:将S1步骤中所获得的酶解上清液中加入高浓度盐溶液,使得盐析体系到达指定盐浓度后低温盐析12小时,离心获取析出蛋白,然后用纯水多次冲洗析出物再次离心过滤,将离心后的絮状蛋白加入与酶解液相同的酸性溶液进行搅拌复溶,获得Ⅰ型胶原蛋白超滤原液; S3:将S2步骤中所获得的Ⅰ型胶原蛋白超滤原液在蠕动泵160rmin转速下通过折叠滤芯进行过滤后进行超滤处理,0.1~5bar压力和5~30Hz泵速下使用切向流超滤技术纯化换液,纯化过程不断加入置换液并检测置换液透出端废液电导率变化直至电导率不再发生变化即纯化完毕,使用超纯水再次超滤使得溶液pH值保持在3.5不再变化后进行浓缩处理,即可获得浓缩后的Ⅰ型胶原蛋白纯化液,将Ⅰ型胶原蛋白纯化液进行冻干处理,获得胶原蛋白冻干海绵; S1步骤中所述蛋白酶为胃蛋白酶,所述酸性溶液为醋酸溶液,所述温和酶解条件为4℃~35℃,搅拌96h; S2步骤中所述高浓度盐溶液为4.5M的NaCl水溶液;盐析体系由高浓度盐溶液和酶解上清液组成;盐析体系最终盐浓度为1.0molL时蛋白达到最大析出量; S2步骤中所述Ⅰ型胶原蛋白超滤原液浓度在1.5mgmL~2.5mgmL,Ⅰ型胶原蛋白纯化液浓度在3mgmL~4mgmL。
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