山东大学宋淑亮获国家专利权
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龙图腾网获悉山东大学申请的专利一种荧光标记多糖及荧光标记多糖的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116789866B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310728630.X,技术领域涉及:C08B37/00;该发明授权一种荧光标记多糖及荧光标记多糖的方法是由宋淑亮;张娥;杨琼;田笑;吉爱国设计研发完成,并于2023-06-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种荧光标记多糖及荧光标记多糖的方法在说明书摘要公布了:本发明涉及多糖的荧光标记方法,具体涉及一种荧光标记多糖及荧光标记多糖的方法。提供带有组氨酸标签异硫氰酸荧光素;将岩藻聚糖的半缩醛羟基与酪胺的羟基进行缩合脱水生成缩醛获得岩藻聚糖‑酪胺,将岩藻聚糖‑酪胺中的氨基与所述带有组氨酸标签异硫氰酸荧光素中的羧基进行酰胺化反应,获得粗品;对粗品依次进行SephadexG‑100柱除杂、镍柱纯化、SephadexG‑100柱除盐,即得。本发明制备的荧光标记多糖能够与镍柱特异性反应,从而能够进一步通过镍柱对荧光标记多糖进行分离纯化,从而提高岩藻聚糖的荧光标记率。
本发明授权一种荧光标记多糖及荧光标记多糖的方法在权利要求书中公布了:1.一种荧光标记多糖的方法,其特征是,提供带有组氨酸标签异硫氰酸荧光素,所述带有组氨酸标签异硫氰酸荧光素由组氨酸形成的多肽与异硫氰酸荧光素通过化学键连接构成,且所述带有组氨酸标签异硫氰酸荧光素中带有羧基; 将岩藻聚糖的半缩醛羟基与酪胺的羟基进行缩合脱水生成缩醛获得岩藻聚糖-酪胺,将岩藻聚糖-酪胺中的氨基与所述带有组氨酸标签异硫氰酸荧光素中的羧基进行酰胺化反应,获得粗品;对粗品依次进行SephadexG-100柱除杂、镍柱纯化、SephadexG-100柱除盐,即得; 酰胺化反应的过程为:将带有组氨酸标签异硫氰酸荧光素溶解,加入N-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-3-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸进行活化,再添加氢氧化钠或氢氧化钾调节pH,然后加入岩藻聚糖-酪胺进行反应;采用磷酸盐缓冲液将带有组氨酸标签异硫氰酸荧光素溶解;磷酸盐缓冲液的pH为5.8~6.2;活化的过程为室温条件下搅拌20~40min;采用氢氧化钠或氢氧化钾调节pH至7.3~7.5;加入岩藻聚糖-酪胺进行反应的温度为36~38℃;加入岩藻聚糖-酪胺进行反应的时间为36~60h; 将酰胺化反应所得的反应液过SephadexG-100柱,收集后冷冻干燥获得第一冻干样品,将第一冻干样品复溶后过镍柱,收集反应液进行冷冻干燥获得第二冻干样品,将第二冻干样品复溶后过SephadexG-100柱,收集后冷冻干燥,即得;复溶采用的溶剂为超纯水; 所述SephadexG-100柱除杂过程中,FITC-岩藻聚糖的流出时间为10-14min,k-FITC流出时间为15-19min; 所述镍柱纯化过程中,上样时间为1-5mL,上样时流速为0.1mLmin,缓冲时间为6-14mL,缓冲时流速为0.5mLmin,洗脱时间为15-30mL,洗脱时流速为0.5mLmin; 所述带有组氨酸标签异硫氰酸荧光素由组氨酸形成的多肽的化学结构式如下: 其中,n=4~8。
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