华南理工大学陈庭坚获国家专利权
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龙图腾网获悉华南理工大学申请的专利一种基于phi29DNA聚合酶滚环复制长链碱基修饰核酸活性制备水凝胶的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115970598B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202111205245.4,技术领域涉及:B01J13/00;该发明授权一种基于phi29DNA聚合酶滚环复制长链碱基修饰核酸活性制备水凝胶的方法是由陈庭坚;张汝洁;彭乐丽;叶方开;陈薛亦;何传平设计研发完成,并于2021-10-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于phi29DNA聚合酶滚环复制长链碱基修饰核酸活性制备水凝胶的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于phi29DNA聚合酶滚环复制长链碱基修饰核酸活性制备水凝胶的方法,属于生物材料技术领域。本发明方法操作如下:在含有phi29DNA聚合酶的滚环扩增反应体系中掺入可配对的、碱基部分的5号位含炔丙氨基修饰的人工核苷酸,制备得到部分碱基上含氨基连接臂的核酸;所得核酸浓缩、退火,将退火产物与化学交联剂在磷酸盐缓冲液中混合,孵育,即获得所述的水凝胶。本发明通过酶法合成碱基上有修饰的核酸,提供了共价结合位点,通过引入共价键解决了基于氢键结合的DNA水凝胶稳定性低的问题。通过滚环扩增可快捷获取大量核酸,为新型核酸水凝胶的形成提供了一种简易、普适性高的制作方法。
本发明授权一种基于phi29DNA聚合酶滚环复制长链碱基修饰核酸活性制备水凝胶的方法在权利要求书中公布了:1.一种基于phi29DNA聚合酶滚环复制长链碱基修饰核酸活性制备水凝胶的方法,其特征在于:包括如下步骤: (1)制备碱基上含氨基连接臂的核酸:在phi29DNA聚合酶缓冲液中加入模板和引物,退火结合;退火后加入dNTPs、牛血清蛋白和phi29DNA聚合酶,所述的dNTPs中掺入可配对的、碱基部分的5号位含炔丙氨基修饰的人工核苷酸5-propargylamino-dCTP,得到phi29DNA聚合酶的滚环扩增反应体系;27~32℃孵育10~14h,制备得到部分碱基上含氨基连接臂的核酸; (2)制备非天然核酸水凝胶:步骤(1)所得核酸浓缩、退火,将退火产物与化学交联剂在磷酸盐缓冲液中混合,孵育,即获得所述的水凝胶; 所述的化学交联剂为磺基双琥珀酰亚胺酯多聚乙二醇NHS-PEGn-NHS,其中,PEGn中的n为聚乙二醇中乙二醇单体的个数,所述n的取值为2~12; 所述的孵育的体系中各物质的终浓度分别为:退火产物2~4μgμL、化学交联剂2~4mmolL;孵育的条件为35~40℃,10~14h。
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