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龙图腾网获悉华中农业大学申请的专利基于增强子甲基化差异的非小细胞肺癌标志物筛选方法及其标志物和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115820860B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-01发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211471119.8，技术领域涉及：C12Q1/6886；该发明授权基于增强子甲基化差异的非小细胞肺癌标志物筛选方法及其标志物和应用是由李国亮;朱志贤设计研发完成，并于2022-11-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于增强子甲基化差异的非小细胞肺癌标志物筛选方法及其标志物和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于增强子甲基化差异的非小细胞肺癌标志物筛选方法及其标志物和应用。人类基因组增强子区域的异常DNA甲基化会导致非小细胞肺癌的异常基因表达调控。本发明所述的非小细胞肺癌标志物筛选方法基于这一原理，进一步结合配对末端标签测序分析染色质相互作用技术ChIA‑PET，筛选出造成非小细胞肺癌异常基因表达调控的基因组增强子区域DNA甲基化标志物。这一筛选方法具有精准、快速、高通量的优点。本发明所述的DNA甲基化标志物为cg00787780、cg16434331、cg21862081和cg24327132。标志物对非小细胞肺癌的诊断效能很好，表现为准确度高、灵敏度高、特异性强，能够更好地帮助提高非小细胞肺癌的检出率。

本发明授权基于增强子甲基化差异的非小细胞肺癌标志物筛选方法及其标志物和应用在权利要求书中公布了：1.一种基于增强子甲基化差异的非小细胞肺癌标志物筛选方法，其特征在于：包括以下步骤： S1、利用WGBS测序技术分别获得非小细胞肺癌样本的全基因组DNA甲基化数据和正常肺组织样本的全基因组DNA甲基化数据； S2、利用BatMeth2软件，对非小细胞肺癌样本的全基因组DNA甲基化数据和正常肺组织样本的全基因组DNA甲基化数据进行DNA甲基化差异分析，得到差异DNA甲基化区域的基因组位置信息； S3、通过EnhancerAtlas2.0数据库分别获取肺组织基因组增强子区域的基因组位置信息或者非小细胞肺癌组织相关细胞系基因组增强子区域的基因组位置信息，结合步骤S2中获得的差异DNA甲基化区域DMR的基因组位置信息，保留与增强子区域的基因组位置存在交集的DMR，即得到增强子区域差异DNA甲基化区域eDMR； S4、利用配对末端标签测序技术获取肺组织的RNAPOL2ChIA-PET数据或非小细胞肺癌相关细胞系的RNAPOL2ChIA-PET数据，利用ChIA-PETToolV3软件，得到肺组织RNAPOL2全基因组三维染色质交互信息或非小细胞肺癌相关细胞系的RNAPOL2全基因组三维染色质交互信息，结合步骤S3得到的增强子区域差异DNA甲基化区域，获得一端位于增强子区域差异DNA甲基化区域，另一端位于基因启动子的全基因组增强子区域差异DNA甲基化区域-基因启动子染色质交互信息； S5、利用步骤S4中获得的全基因组增强子区域差异DNA甲基化区域-基因启动子交互对信息，筛选得到与基因启动子有染色质交互的eDMR； S6、通过IlluminaInfiniumHumanMethylation450KBeadChiP分别获取非小细胞肺癌样本的DNA甲基化数据和正常肺组织样本的DNA甲基化数据； S7、基于S6收集的非小细胞肺癌样本的DNA甲基化数据和正常肺组织样本的DNA甲基化数据，利用统计学方法得到非小细胞肺癌样本的差异DNA甲基化位点和正常肺组织样本间的差异DNA甲基化位点；基于步骤S5筛选得到的eDMR，筛选出基因组位置位于eDMR内的差异DNA甲基化位点作为候选标志物； S8、利用Lasso方法，以S7中得到的候选标志物差异DNA甲基化位点的甲基化程度作为自变量，以S6中收集的非小细胞肺癌样本的DNA甲基化数据和正常肺组织样本的DNA甲基化数据中样本类型作为因变量，在S6中收集的非小细胞肺癌样本的DNA甲基化数据和正常肺组织样本的DNA甲基化数据上建立线性回归模型，保留模型中系数不等于0的差异DNA甲基化位点作为最终的标志物； S9、利用450K甲基化芯片检测技术分别获取非小细胞肺癌样本的DNA甲基化数据和正常肺组织样本的DNA甲基化数据集，或者从已经公开发表的数据库中分别下载非小细胞肺癌样本的DNA甲基化数据和正常肺组织样本的DNA甲基化数据集；利用获取的数据集构建逻辑斯蒂回归模型，利用逻辑斯蒂回归模型评估步骤S8得到标志物对于非小细胞肺癌诊断的效能，其中，DNA甲基化数据集为独立的数据集，而非S6中的数据集。

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