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龙图腾网获悉浙江理工大学申请的专利一种基于双抗夹心法检测丝素蛋白的荧光试纸的制备方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115343465B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-11发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211009896.0，技术领域涉及：G01N33/533；该发明授权一种基于双抗夹心法检测丝素蛋白的荧光试纸的制备方法是由闫琳;陈博逸;潘楠楠;王秉;胡智文设计研发完成，并于2022-08-22向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于双抗夹心法检测丝素蛋白的荧光试纸的制备方法在说明书摘要公布了：本发明涉及文物检测技术领域，公开了一种基于双抗夹心法检测丝素蛋白的荧光试纸的制备方法，本发明构建了一种基于双抗夹心法检测丝素蛋白的荧光试纸，通过聚苯乙烯荧光微球表面羧基与丝素蛋白单克隆抗体表面氨基的化学结合，在检测线喷涂丝素蛋白多克隆抗体，质控线喷涂羊抗鼠IgG，制备成双抗夹心检测原理的荧光免疫层析试纸，本发明检测时与传统胶体金竞争法显色不同，两条线同时显色即为阳性，仅有质控线显色则为阴性。

本发明授权一种基于双抗夹心法检测丝素蛋白的荧光试纸的制备方法在权利要求书中公布了：1.一种基于双抗夹心法检测丝素蛋白的荧光试纸的制备方法，其特征在于包括以下步骤： 1）羧基功能化聚苯乙烯荧光微球制备：将聚苯乙烯纳米微球分散在含有SDS的水中，然后加入包含金属铕螯合物荧光染料的CH2Cl2，通过超声波使聚苯乙烯纳米微球溶胀以使金属铕螯合物荧光染料负载于溶胀的孔隙中，混合50-70s后，35-45℃下搅拌，旋转蒸发除去CH2Cl2使溶胀的纳米微球恢复到原尺寸，进而将染料包覆；然后离心收集负载有染料的纳米微球，水洗除去SDS，进一步洗涤并用乙醇离心数次，直到上清液中未观察到荧光；将纳米微球进行干燥并以1.5-2.5mgmL的浓度重新分散于水中；取1mL所得微球分散液，加入4-6mg聚丙烯酸超声处理5-15min对微球表面进行羧基化，用水离心洗涤后，得到羧基功能化聚苯乙烯荧光微球，待用； 聚苯乙烯纳米微球、含有SDS的水中，和包含8-12mgmL金属铕螯合物荧光染料的CH2Cl2用量比为90-110mg:10ml:0.3-0.7ml； 含有SDS的水中SDS的浓度为0.02-0.03mg；包含金属铕螯合物荧光染料的CH2Cl2中金属铕螯合物荧光染料的浓度为8-12mgmL； 2）聚苯乙烯荧光微球标记丝素蛋白单克隆抗体的制备：将羧基功能化聚苯乙烯荧光微球加入水中超声分散，随后加入N-羟基琥珀酰亚胺乙醇溶液和1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐乙醇溶液，室温摇匀，离心，去上清液；加入硼酸盐抗体偶联缓冲液超声分散后，边搅拌边滴加丝素蛋白单克隆抗体，室温搅拌；加入BSA硅油封闭；离心，去上清液，加入保存液混匀，冷藏避光保存； 3）试纸条的组装：用划膜机将用PBS缓冲溶液配制而成的丝素蛋白多克隆抗体溶液和羊抗鼠IgG溶液分别喷在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，烘干备用；将硼酸盐缓冲溶液稀释的聚苯乙烯荧光微球标记的丝素蛋白单克隆抗体包被在结合垫上，烘干备用；将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成宽的试纸条，干燥密封储存。

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