东北农业大学姜毓君获国家专利权
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龙图腾网获悉东北农业大学申请的专利一种检测沙门氏菌的适体生物传感器及其制备方法与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN114705854B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-11发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210241766.3,技术领域涉及:G01N33/569;该发明授权一种检测沙门氏菌的适体生物传感器及其制备方法与应用是由姜毓君;满朝新;杨鑫焱;庞立冬设计研发完成,并于2022-03-11向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种检测沙门氏菌的适体生物传感器及其制备方法与应用在说明书摘要公布了:一种检测沙门氏菌的适体生物传感器及其制备方法与应用,属于食品安全技术领域。为了解决现有技术检测沙门氏菌中存在的问题,本发明提供了一种适体生物传感器,其检测原理为SMBs‑cDNA2复合物、适配体Apt2和AuNPs‑cDNA3探针建立的夹心结构SMBs‑Apt2‑AuNPs荧光猝灭系统能够在没有沙门氏菌的情况下保持完整性,系统中的AuNPs与AgNCs发生FRET以猝灭AgNCs的荧光;在有沙门氏菌的情况下,沙门氏菌与作为连接桥梁的Apt2结合,SMBs‑Apt2‑AuNPs系统被破坏,在上清液中悬浮的AuNPs‑cDNA3探针和结合Apt2的沙门氏菌通过磁分离被去除,从而导致荧光不被猝灭。本发明获得的适体生物传感器具有简单、成本低、速度快以及灵敏度高等特点,可用于实时检测食品及食品加工过程中的沙门氏菌污染,尤其是乳制品生产中的沙门氏菌的污染。
本发明授权一种检测沙门氏菌的适体生物传感器及其制备方法与应用在权利要求书中公布了:1.一种快速检测沙门氏菌的适体生物传感器的制备方法,其特征在于,所述适体生物传感器包括由SMBs-cDNA2复合物、适配体Apt2和AuNPs-cDNA3探针建立的夹心结构SMBs-Apt2-AuNPs,和被用作荧光信号的以DNA为模板合成的银纳米簇DNA-AgNCs;所述SMBs-cDNA2复合物由链霉亲和素磁珠与生物素修饰的核酸链cDNA2连接,cDNA2的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示;所述AuNPs-cDNA3探针由AuNPs溶液与巯基修饰的cDNA3制备而成,cDNA3的核苷酸序列如SEQIDNO.2;所述适配体Apt2的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示;所述DNA模板的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示; 在没有沙门氏菌的情况下,SMBs-Apt2-AuNPs系统保持完整性,当加入DNA-AgNCs时,系统中的AuNPs与AgNCs发生荧光共振能量转移以猝灭AgNCs的荧光;在有沙门氏菌的情况下,在上清液中悬浮的AuNPs-cDNA3探针和结合Apt2的沙门氏菌通过磁分离被去除,从而导致荧光不被猝灭; 所述适体生物传感器的制备方法包括如下步骤: (1)制备SMBs-cDNA2复合物:SMBs经1×BW缓冲液洗涤后,重悬于2×BW缓冲液中,加入等体积的cDNA2溶液孵育,去除上清,经1×BW缓冲液洗涤后,重悬于PBS溶液中,得到SMBs-cDNA2复合物; (2)制备AuNPs-cDNA3探针:将巯基修饰的cDNA3与AuNPs溶液混合,孵育后加入磷酸缓冲液A,再次进行孵育,分多次缓慢加入含有2molLNaCl的磷酸缓冲液B进行老化,直至溶液中NaCl浓度达到0.2molL,离心后用去离子水重悬获得AuNP-cDNA3探针; (3)制备SMBs-Apt2-AuNPs系统及合成DNA-AgNCs:将2.5nMApt2、40μgSMBs-cDNA2复合物和15μgAuNPs-cDNA3探针在100μLPBS溶液中混合,并在37℃条件下孵育120min,磁分离去除上清,再用PBS溶液洗涤三次获得SMBs-Apt2-AuNPs系统;向含有0.5~5nmolDNA模板的浓度为0.002~0.2molL,pH为7的50~200μLPB溶液中加入1~20μL浓度为0.002~10mmolL的AgNO3溶液,于4℃黑暗中孵育20min,加入0.5~20μL浓度为0.1~10mmolL的NaBH4剧烈震荡1min,使用前于0~25℃避光稳定5~24h,以使用的DNA浓度即为制备的DNA-AgNCs的浓度;在合成DNA-AgNCs的过程中,DNA与Ag+的摩尔浓度比为1:6,NaBH4与Ag+的摩尔浓度比为5:6。
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