吉林如诺生物科技有限公司白雪获国家专利权
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龙图腾网获悉吉林如诺生物科技有限公司申请的专利一种基于CRISPR/Cas12a系统和点击化学的旋毛虫检测试剂盒及使用方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119530342B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-22发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411724315.0,技术领域涉及:C12Q1/6804;该发明授权一种基于CRISPR/Cas12a系统和点击化学的旋毛虫检测试剂盒及使用方法和应用是由白雪;刘明远;王洋;于瑶;赵连静;金雪敏;徐凝;刘晓雷;杨勇设计研发完成,并于2024-11-28向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于CRISPR/Cas12a系统和点击化学的旋毛虫检测试剂盒及使用方法和应用在说明书摘要公布了:一种基于CRISPRCas12a系统和点击化学的旋毛虫检测试剂盒及使用方法和应用,属于免疫学检测技术领域。本发明为解决现有技术中的旋毛虫检测方法存在耗时耗力、灵敏度低、易造成漏检,以及CRISPRCas12a系统信号输出探针、人工点击酶复杂的制备过程、纳米材料不易储存和运输的技术问题,提供了一种旋毛虫检测试剂盒,所述试剂盒包括:CRISPRCas12a体系、点击反应体系、96孔反应板、磁珠探针、胶体金探针、洗涤液、CuSO4溶液、SA溶液和标准品。本发明提供的旋毛虫检测试剂盒具有高特异性、长期稳定、实用性强、质量可控、操作简单、高灵敏度、易保存等优点,可应用于旋毛虫检测,市场前景良好。
本发明授权一种基于CRISPR/Cas12a系统和点击化学的旋毛虫检测试剂盒及使用方法和应用在权利要求书中公布了:1.一种基于CRISPRCas12a系统和点击化学的旋毛虫检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:CRISPRCas12a体系、点击反应体系、96孔反应板、磁珠探针、胶体金探针、洗涤液、CuSO4溶液、SA溶液和标准品; 所述磁珠探针为标记多克隆抗体的探针,所述磁珠探针的制备方法为: S1:使用0.05M、pH=6的MES缓冲液洗涤10mgCOOH修饰的磁珠三次; S2:将500µL4mgmL的EDC和5.5mg磺基-NHS添加到S1中获得的磁珠中,并在室温下孵育15min进行活化; S3:使用500µL偶联溶液洗涤S2中活化后的磁珠3次;所述偶联溶液pH=7.5、由0.1MNa3PO4和0.15MNaCl配置获得; S4:将500µL偶联溶液和0.5mg多克隆抗体混合均匀,将上述混合物在室温条件下振荡4h; S5:利用S3中活化后的磁珠,对S4中未结合的多克隆抗体进行磁分离,再加入500µL0.1%的BSA,在室温条件下摇动30min,获得磁珠探针; S6:使用10mM、pH=7.2的PBS洗涤S5中获得的磁珠探针3次,重新悬浮在1mLPBS中,储存在4℃条件下; 所述胶体金探针为标记ssDNA和单克隆抗体的探针,所述胶体金探针的制备方法为: 将1mL4.2nM的AuNP与4µL100mM的K2CO3混合,室温振荡3min;再加入10µL0.1mM的ssDNA和6µg的单克隆抗体,获得探针;置于-20℃条件下冷冻1h,解冻后,对上述探针进行三轮离心,每轮均在12800g条件下离心20min,将沉淀物重新悬浮在10mM、pH=7.4的PBS中; 所述单克隆抗体为Ts-WN10-1H9,所述Ts-WN10-1H9单克隆抗体是由杂交瘤细胞株WN10-1H9制备获得,所述杂交瘤细胞株WN10-1H9的保藏编号为CGMCCNo.18316; 所述ssDNA的序列为SEQIDNO.1所示; 所述CRISPRCas12a体系包括:1XNEB2.1缓冲液3.6mL,20µM的gRNA5µL,10µM的Cas12a10µL和100µM的含有20个胸腺嘧啶区域的DNA链36µL;所述gRNA的序列为SEQIDNO.2所示。
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