南京工业大学刘金华获国家专利权
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龙图腾网获悉南京工业大学申请的专利一种通过顺序整合ALP、TYR、HRP构建三酶级联荧光免疫传感平台的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114858771B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-22发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210488603.5，技术领域涉及：G01N21/64；该发明授权一种通过顺序整合ALP、TYR、HRP构建三酶级联荧光免疫传感平台的方法是由刘金华;孙玉洁;马雯霖;马怡菲;刘晓雪设计研发完成，并于2022-05-06向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种通过顺序整合ALP、TYR、HRP构建三酶级联荧光免疫传感平台的方法在说明书摘要公布了：本发明通过顺序整合ALP、TYR和HRP构建了一个三酶级联触发的荧光免疫传感平台的方法。此平台依赖于HRP和H2O2可以促进多巴胺和1，5‑萘二酚的快速原位荧光反应产生强烈的黄色荧光化合物AFC。通过核磁质谱表征确定了合成的AFC的分子式C18H15NO4和结构，并基于ALP可以诱导对氨基乙基苯基磷酸盐PAPP的水解产生中间体酪胺，TYR可以催化DA的产生，进而激活HRP，构建了三酶级荧光免疫系统。利用此系统实现了对心肌钙蛋白I的高灵敏检测。这种先进的信号传导方案可以为研究多酶级联系统和构建多功能生物传感器提供一种新方法。
本发明授权一种通过顺序整合ALP、TYR、HRP构建三酶级联荧光免疫传感平台的方法在权利要求书中公布了：1.一种通过顺序整合ALP-TYR-HRP构建一个三酶级联触发的荧光免疫传感平台用于检测ALP的方法，其特征在于： 将0-1250mUmL不同浓度的碱性磷酸酶ALP添加到含有1mM对氨基乙基苯基磷酸盐PAPP的10mM,pH=9Tris-HCl缓冲液中；混合物在37°C下孵育30分钟后，将ALP-PAPP混合溶液添加到含3UmL酪氨酸酶TYR的10mM，pH=7.4Tris-HCl缓冲溶液中；然后将ALP-PAPP-TYR混合溶液添加到含有30μM1，5-萘二酚DHA、60μMH2O2和4mUmL辣根过氧化物酶HRP的10mM，pH=7.4Tris-HCl缓冲溶液中，然后将混合物在37°C下孵育20分钟；在室温下孵育3分钟后测量上述混合溶液的荧光光谱；激发波长和发射波长分别为490nm和550nm；该方法对ALP的检测范围为0.05-1250mUmL,检测限为0.017mUmL。
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