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中国科学院大连化学物理研究所张丽华获国家专利权

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龙图腾网获悉中国科学院大连化学物理研究所申请的专利基于氧化交联和硼亲和富集的儿茶酚类药物靶标鉴定方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116218943B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-22发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202111477820.6,技术领域涉及:C12Q1/02;该发明授权基于氧化交联和硼亲和富集的儿茶酚类药物靶标鉴定方法是由张丽华;乔子淳;单亦初;江波;赵宝锋;梁振;张玉奎设计研发完成,并于2021-12-06向国家知识产权局提交的专利申请。

基于氧化交联和硼亲和富集的儿茶酚类药物靶标鉴定方法在说明书摘要公布了:本发明涉及一种用于筛选儿茶酚类药物靶标的新方法。该方法利用儿茶酚氧化活化后产生的高活性亲电性的邻醌与亲核性氨基酸侧链发生共价反应从而固定药物与靶蛋白的相互作用,再利用苯硼酸特异性结合1,2‑二醇的原理对药靶复合物实现分离富集,富集后的样品通过液质联用系统进行定量分析,以实现儿茶酚类药物的细胞原位靶标筛选与鉴定。本方法无需对药物进行改造,可以实现细胞原位的靶标鉴定,靶标鉴定准确度高、实际应用性强,为天然产物中广泛存在的儿茶酚类小分子的相互作用蛋白的鉴定提供了一种有效的工具。

本发明授权基于氧化交联和硼亲和富集的儿茶酚类药物靶标鉴定方法在权利要求书中公布了:1.基于氧化交联和硼亲和富集的儿茶酚类药物靶标鉴定方法,其特征在于,包括以下步骤:1)向SILAC标记后的细胞中加入儿茶酚类药物进行孵育;向细胞中加入氧化剂再次孵育,得实验组;以不加入儿茶酚类药物进行孵育或不加入氧化剂进行再次孵育的SILAC标记后的细胞作为对照组;2)将实验组和对照组细胞分别分散于离子液体中破碎,利用离子液体提取蛋白质复合物,对蛋白进行二硫键还原、烷基化处理;3)基于苯硼酸与邻二醇的结合亲和力,使用固载有环状苯硼酸的材料对药靶复合物进行富集,并在pH<5的条件下洗脱富集到的药靶复合物;4)将得到的蛋白质复合物酶解成肽段,用液质联用系统进行质谱数据采集;结合SILAC标记定量,通过标记强度差异初步筛选鉴定儿茶酚类药物的潜在靶标蛋白;5)对初步鉴定的潜在靶蛋白进行基因本体聚类分析即GO分析和KEGG通路分析,获得其靶向蛋白参与的生物学过程; 所述的儿茶酚类药物为:异丙肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、多巴酚丁胺、丹参素、丹参素异丙酯、丹参素冰片酯含有邻苯二酚基团的药物中的一种或多种; 所述的氧化剂包括:高碘酸钠、过氧化氢、酪氨酸酶中的一种或多种; 提取的蛋白质复合物样品中加入二硫苏糖醇或三2-羧乙基膦,高温变性还原,所述高温变性的温度为37-95℃,时间为5分钟-2小时; 向变性后的蛋白样品中加入碘乙酰胺进行避光烷基化15-30分钟; 固载有环状苯硼酸的材料为Fe3O4PDAGOPEICBX,是在四氧化三铁的磁球表面依次包裹聚多巴胺、单层氧化石墨烯,聚乙烯亚胺和1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1,2]氧杂硼杂环戊烷-6-羧酸得到; SILAC标记定量是基于母离子的定量方法,对样品进行稳定同位素的轻、中、重标记,或对样品进行稳定同位素的轻、重标记,质谱采集后通过提取一级谱中带有轻、中、重标记的成对的母离子峰面积和峰强度,或轻、重标记的成对的母离子峰面积,实现相对定量分析; 通过标记强度差异初步筛选鉴定儿茶酚类药物的潜在靶标蛋白:其中实验组和对照组峰强度相比,峰强度倍数差异大于2的蛋白被认为是通过标记鉴定到的蛋白,从而去除非特异性吸附蛋白; 同时,使用二级谱图对鉴定到的蛋白的肽段进行序列测定从而进行蛋白鉴定; 所述细胞包括:肿瘤细胞、海马神经元细胞、心肌成纤维细胞中的一种或多种。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人中国科学院大连化学物理研究所,其通讯地址为:116023 辽宁省大连市沙河口区中山路457-41号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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