浙江工业大学柳志强获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江工业大学申请的专利一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116103215B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310210617.5,技术领域涉及:C12N1/21;该发明授权一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌及其应用是由柳志强;李雪峰;周俊平;徐建妙;张博;黄良刚;郑裕国设计研发完成,并于2023-03-07向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌及其应用在说明书摘要公布了:本发明涉及基因工程技术领域,公开了一种高产L‑2‑氨基丁酸的无质粒基因工程菌及其应用。本发明提供的产L‑2‑氨基丁酸的无质粒基因工程菌,以EscherichiacoliTHR为底盘细胞经代谢工程和基因编辑技术改造得到,该基因工程菌菌株能以葡萄糖为原料,通过发酵培养得到L‑2‑氨基丁酸,在无质粒增加外源酶活的情况下,5L发酵罐分批补料发酵产量达到13.81gL,发酵成本低,产物浓度高,没有副产物影响,产物易于纯化,适用于工业应用。
本发明授权一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌及其应用在权利要求书中公布了:1.一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌,其特征在于:由以下方法构建而成: (1)以E.coliTHR为底盘菌,将菌株E.coliTHR基因组中的ptsG基因用ilvA*基因及leuDH基因替换,得到重组菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDH; (2)将菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDH接种到2-酮丁酸液体培养基中进行传代培养,筛选能在2-酮丁酸浓度不低于50gL的液体培养基中正常生长的菌株,得到菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut; (3)将菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut基因组中相邻的ltaE基因及poxB基因用leuDH基因替换,得到重组菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH; (4)将菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH基因组中的focA基因及pflB基因敲除,得到重组菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△pflB; (5)将菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△ pflB基因组中相邻的pta基因及ackA基因用ilvA*基因和leuDH基因替换,得到重组菌株E. coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△pflB△pta△ackA:: ilvA*-leuDH; (6)将菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△pflB △pta△ackA::ilvA*-leuDH基因组中的mgsA基因用ilvA*基因和leuDH基因替换,得到重组菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△pflB△pta△ ackA::ilvA*-leuDH△mgsA::ilvA*-leuDH,即所述高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌; 其中,所述ilvA*基因序列如SEQIDNo.1所示。
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