北京林业大学林金星获国家专利权
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龙图腾网获悉北京林业大学申请的专利一种Halo-tag标记和3D超分辨成像观察植物活细胞核蛋白的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115825020B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211070807.3,技术领域涉及:G01N21/64;该发明授权一种Halo-tag标记和3D超分辨成像观察植物活细胞核蛋白的方法是由林金星;钱虹萍;崔亚宁;张原设计研发完成,并于2022-09-01向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种Halo-tag标记和3D超分辨成像观察植物活细胞核蛋白的方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种Halo‑tag标记和3D超分辨成像观察植物活细胞核蛋白的方法,属于分子标记技术和显微成像技术领域。本发明提供的观察植物活细胞核蛋白的方法,包括如下步骤:步骤一:获取Halo‑tag转基因植株;步骤二:制备和培养植物原生质体细胞;步骤三:Halo‑tag荧光染料的孵育和漂洗;步骤四:3D‑SIM超分辨成像观察;步骤五:利用软件分析图像和统计相关参数。本发明方法可以长时间的、特异性的标记植物细胞核内蛋白质,抗猝灭和漂白能力大大提高,并且标记过程非常十分简单和快速,能够实现植物细胞核内的目标分子的长时间追踪和精细定位观察。
本发明授权一种Halo-tag标记和3D超分辨成像观察植物活细胞核蛋白的方法在权利要求书中公布了:1.一种Halo-tag标记和3D超分辨成像观察植物活细胞核蛋白的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一:获取Halo-tag转基因植株;步骤二:制备和培养植物原生质体细胞;步骤三:Halo-tag荧光染料的孵育和漂洗;步骤四:3D-SIM超分辨成像观察;步骤五:利用软件分析图像和统计相关参数; 所述步骤一具体为:将Halo-tag基因序列连接到带有目的基因的真核表达载体pCAMBIA2300-目的基因中,获得pCAMBIA2300-目的基因-Halotag,将pCAMBIA2300-目的基因-Halotag侵染进入植物中,获得带有Halo-tag标签的转基因植株; 所述步骤三中孵育具体为:利用Halo-tagTMR荧光染料进行染色,混匀后,避光28℃-37℃孵育15min-60min; 所述步骤三中漂洗具体为:采用干净培养基清洗后,避光条件下采用脱色摇床孵育,所述脱色摇床的转速为40rpm-45rpm; 所述步骤四具体为:对标记后的原生质体细胞核使用DAPI荧光染料进行染色,洗涤后使用结构光超分辨显微镜,用3D成像模式,调整激光强度为4-6%、曝光时间在60ms以下,选取405和568nm双通道激发光对染色后的原生质体进行观察。
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