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龙图腾网获悉广州市碳码科技有限责任公司申请的专利一种barcode微滴的单细胞测序方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115058503B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210729616.7，技术领域涉及：C12Q1/6869；该发明授权一种barcode微滴的单细胞测序方法是由方志远;陈国强;罗微;周丹;邓裕华;杜岗设计研发完成，并于2022-06-24向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种barcode微滴的单细胞测序方法在说明书摘要公布了：本发明属于单细胞测序方法的技术领域，具体涉及一种barcode微滴的单细胞测序方法，其为基于纳米和微米尺寸的barcode微滴用于单细胞及亚细胞结构的单细胞测序，适合于全长mRNA测序及随机引物法mRNA测序。

本发明授权一种barcode微滴的单细胞测序方法在权利要求书中公布了：1.一种barcode微滴的单细胞测序方法，其特征在于，包括如下步骤： 1）barcode微滴制备及特征 1.1）建立barcode微滴 将barcode微滴分为多个大的液滴库进行建库，利用微流控芯片系统分离微滴，包括barcode库1、barcode库2、barcode库3，…，以此类推； 所述barcode库1包括100个细分，为barcode1-1，barcode1-2，....，barcode1-100； 所述barcode1-1制备出10n个液滴，其中n＞1，每个液滴含有不低于106个barcode1-1，同理制备100个细分barcode“1-n”的液滴库barcode1-1-barcode1-100，并混合成为液滴库barcode库1，含有10n+2个液滴； 同理，制备其他barcode“N-n”液滴库N； 1.2）微滴制备分离时分别从混合库1以及其后的n个库中分别取1个液滴，n≥1，将取出的多个液滴与扩增mix混合形成一个扩增液滴； 扩增后最后对产物进行破乳，收集cDNA并进行建库，进行测序和分析； 2）对全长mRNA以及引物mRNA进行建库测序：将包含多个片段的Barcode用于标记细胞，以及一个与Barcode连接的UMI来标记转录本； 所述Barcode为3段序列组成，分别为上游Barcode、中间Barcode和下游Barcode； 所述上游Barcode的3’端为3-5个G，用于RACE反转录，5’端为adapter序列，用于连接测序接头； 上游Barcode的序列为：5'-adapter+jjjjjj+GGG-3’； 所述j为细胞标记核酸序列celllable； 所述中间Barcode的3’端为polyT序列，用于mRNA的反转录，5’端为linker； 中间Barcode的序列为：3'-polyT+jjjjjj+linker-5’； 所述j为celllable； 所述下游Barcode3’端为anti-linker，与上一个中间Barcode的linker互补，中间为celllable，5’端为UMI序列； 下游Barcode的序列为：5'-nnnnnnnnnnnnnn++jjjjjj+anti-linker-3’； 所述n为UMI； 所述UMI由4~10个核苷酸随机排列组成，在mRNA反转录后，进入到文库中，每一个mRNA随机连上一个UMI，因此可以计数不同的UMI，最终实现mRNA的计数； 3）利用转座酶法或者随机引物法扩增cDNA得到双链DNA文库，并采用Illumina高通量测序系统进行测序。

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