中国农业科学院兰州兽医研究所付元芳获国家专利权
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龙图腾网获悉中国农业科学院兰州兽医研究所申请的专利一种管式化学发光免疫分析技术检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的试剂盒及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115541877B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-29发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211136363.9,技术领域涉及:G01N33/569;该发明授权一种管式化学发光免疫分析技术检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的试剂盒及其应用是由付元芳;包艳芳;林密;孙普;曹轶梅;何莉;蒋韬;卢曾军;刘在新设计研发完成,并于2022-09-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种管式化学发光免疫分析技术检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的试剂盒及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种基于管式化学发光免疫分析技术检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的试剂盒及其应用,属于体外检测技术领域。本发明提供的试剂盒包括磁微粒偶联3ABC融合蛋白、酶标3A抗体、标准品、稀释液、浓缩洗涤液和发光底物。本发明所述试剂盒能检测猪、牛、羊血清中3ABC的特异性抗体,并且实现定量、自动化、高敏感性、高重复性检测,与ELISA检测试剂盒相比具有明显的优势。
本发明授权一种管式化学发光免疫分析技术检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的试剂盒及其应用在权利要求书中公布了:1.一种基于管式化学发光免疫分析技术检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的试剂盒,其特征在于,由以下组分组成:磁微粒偶联3ABC融合蛋白、酶标抗体、稀释液、标准品、标准品稀释液、浓缩洗涤液和发光底物; 所述酶标抗体中抗体为3A单克隆抗体; 所述3A单克隆抗体是由杂交瘤细胞株3A24分泌得到; 所述标准品为用标准品稀释液梯度稀释的口蹄疫病毒感染动物血清,口蹄疫感染抗体含量分别为0U、2.5U、5U、10U、20U、40U、80U、160U、320U、640U;所述口蹄疫病毒感染动物血清为采自口蹄疫病毒感染后1~3个月的牛; 所述标准品稀释液为0.05~0.2M、pH为值7的PBS缓冲液; 所述PBS缓冲液含有质量浓度0.1%~2%的BSA、质量浓度0.1%~1%的PEG、质量浓度0.5%~5%的海藻糖、质量浓度0.1%~0.5%的明胶和体积浓度0.01%~0.5%的ProClin300; 所述磁微粒偶联3ABC融合蛋白的制备方法,取1mg磁珠,用0.1MMES稀释至10mgml,用磁铁充分吸附磁珠,弃去上清液,再加入100μL0.1MMES,混匀磁珠,重复清洗操作1次; 从-20℃取出EDC、NHS,恢复至室温; 称取EDC、NHS;分别用0.1MMES溶解,配制成10mgml; 向磁珠中加入NHS溶液10μl,再加入EDC溶液10μl,常温混匀反应30min; 用磁铁充分吸附磁珠,弃去上清液,再加入100μL0.1MMES,混匀磁珠,得到活化磁珠; 在所述活化磁珠中加入待包被口蹄疫病毒3ABC融合蛋白30μg,混匀磁珠;室温震荡包被3h;加入10μl10%BSA溶液,室温震荡封闭3h;用清洗液清洗3次,得到磁微粒偶联3ABC融合蛋白; 所述稀释液为0.05~0.2MpH值为7的MOPS缓冲液;所述MOPS缓冲液含有质量浓度0.1%~2%的BSA、体积浓度0.01%~0.5%的Tween-20、体积浓度0.01%~0.5%的ProClin300、0.01~0.5M的MgCl2、0.01~0.5M的NaCl、质量浓度0.05%~3%的水解乳蛋白和质量浓度0.1%~1%的PEG6000;所述稀释液用于稀释磁微粒偶联3ABC融合蛋白和酶标抗体至各自的工作浓度,形成工作液;磁微粒偶联3ABC融合蛋白工作液的浓度为0.2~0.5mgml;酶标抗体工作液的浓度为1:500~1:5000; 所述浓缩洗涤液为含体积浓度0.1%~0.5%Tween-20的pH值为7的PBS缓冲液或者含体积浓度0.1%~0.5%的Tween-20的0.05MpH值为8的Tris缓冲液;所述浓缩洗涤液在使用时,稀释10~30倍; 所述酶标抗体中的酶为碱性磷酸酶;所述发光底物与酶标抗体中的酶对应。
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