北京市眼科研究所;首都医科大学附属北京同仁医院金子兵获国家专利权
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龙图腾网获悉北京市眼科研究所;首都医科大学附属北京同仁医院申请的专利体外培养玻璃体视网膜类器官的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119979460B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-05发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510461424.6,技术领域涉及:C12N5/079;该发明授权体外培养玻璃体视网膜类器官的方法是由金子兵;张晓设计研发完成,并于2025-04-14向国家知识产权局提交的专利申请。
本体外培养玻璃体视网膜类器官的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了体外培养玻璃体视网膜类器官的方法,包括如下步骤:(1)将多能干细胞扩增培养至细胞汇合度50%~90%;(2)第0天,将干细胞采用消化液进行消化;加入神经球培养基进行培养;加入基质胶进行培养后,再加入神经球培养基进行培养,得到细胞悬液;(3)向细胞悬液中加入ROCK通路抑制剂,在神经球培养基中培养3~5天,得到外胚层神经球;(4)将神经球培养基换成类玻璃体培养基Ⅰ,同时加入TGFB1蛋白,且放置于摇床震荡培养至25天~28天;(5)将类玻璃体培养基Ⅰ换成类玻璃体培养基Ⅱ,培养至第60天~300天,即得到玻璃体视网膜类器官。本发明体外培养的视网膜的玻璃体类器官能模拟体内玻璃体。
本发明授权体外培养玻璃体视网膜类器官的方法在权利要求书中公布了:1.一种体外培养玻璃体视网膜类器官的方法,包括如下步骤: 1将多能干细胞扩增培养至细胞汇合度50%~90%; 2第0天,将所述步骤1的细胞汇合度50%~90%的干细胞采用消化液进行消化;加入神经球培养基进行培养,得到细胞悬液Ⅰ;离心细胞悬液Ⅰ,弃掉上清液;加入基质胶后,再加入神经球培养基进行培养,得到细胞悬液Ⅱ; 3向细胞悬液Ⅱ中加入ROCK通路抑制剂,在神经球培养基中培养3~5天,得到外胚层神经球; 4将所述步骤3的神经球培养基换成类玻璃体培养基Ⅰ,同时加入浓度为15ngmL~50ngmL的TGFB1蛋白,且放置于摇床震荡培养至第25天~28天; 5将所述步骤4的类玻璃体培养基Ⅰ换成类玻璃体培养基Ⅱ,培养至第60天~300天,即得到所述玻璃体视网膜类器官; 所述神经球培养基含有如下体积百分比浓度的成分:30%-70%DMEMF12培养基、30%-70%Neurobasal培养基、0.5mM-4mML-谷氨酰胺、0.05mM-0.2mMβ-巯基乙醇、0.1%-1%N2添加剂、0.5%-2%B27添加剂、1μM~20μMRock通路抑制剂; 所述类玻璃体培养基Ⅰ含有如下体积百分比浓度的成分:45%-85%DMEM培养基、15%-55%F12培养基、0.5%-2%非必需氨基酸NEAA、1%-8%胎牛血清、5ngmL-55ngmLTGFB1蛋白、0.1%-5%N2添加剂; 所述类玻璃体培养基Ⅱ含有如下体积百分比浓度的成分:45%-85%DMEM培养基、15%-55%F12培养基、2%-10%胎牛血清、0.5%-2%L-谷氨酰胺、10ngmL-100ngmL牛磺酸、1%-4%B27添加剂、10ngmL-200ngmLTGFB1蛋白、0.1μM-10μM视黄酸。
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