广州市第一人民医院(广州消化疾病中心、广州医科大学附属市一人民医院、华南理工大学附属第二医院)李建洪获国家专利权
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龙图腾网获悉广州市第一人民医院(广州消化疾病中心、广州医科大学附属市一人民医院、华南理工大学附属第二医院)申请的专利一种地锦草来源细胞外囊泡在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118892504B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-05发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410974781.8,技术领域涉及:A61K36/47;该发明授权一种地锦草来源细胞外囊泡在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用是由李建洪;梁至;倪穗琴;林晓纯;徐婧;聂玉强设计研发完成,并于2024-07-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种地锦草来源细胞外囊泡在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用在说明书摘要公布了:本发明属于溃疡性结肠炎治疗领域,提供了一种地锦草来源细胞外囊泡在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用,包括地锦草来源细胞外囊泡的提取制备和地锦草来源的细胞外囊泡对小鼠溃疡性结肠炎的防治作用研究,具体步骤如下:步骤一,地锦草的叶细胞提取:选新鲜、健康的地锦草叶片作为实验材料并剪碎,将剪碎后的样本加入酶解液中,确保样本与酶解液充分接触并孵育,期间轻柔地翻转或搅拌以促进酶解过程,从而分离出叶细胞;步骤二,地锦草的叶细胞培养:将地锦草的叶细胞置于培养基内部培养;本发明证实了地锦草来源细胞外囊泡可以用于治疗溃疡性结肠炎,为临床防治IBD的新药物开发提供实验基础,具有较好的应用前景。
本发明授权一种地锦草来源细胞外囊泡在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用在权利要求书中公布了:1.一种地锦草来源细胞外囊泡在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用,其特征在于,具体步骤如下: 步骤一,地锦草的叶细胞提取:选新鲜、健康的地锦草叶片作为实验材料并剪碎,将剪碎后的样本加入酶解液中,确保样本与酶解液充分接触并孵育,期间轻柔地翻转或搅拌以促进酶解过程,从而分离出叶细胞; 酶解法分离叶细胞的酶解温度设置为45℃,酶解pH值为4.5,酶解时间为45min,酶解液为0.6%纤维素酶和0.25%果胶酶的混合酶解液,降解植物细胞壁后释放出叶细胞,酶解过程中通过缓冲液维持pH值稳定,保护叶细胞免受损伤; 步骤二,地锦草的叶细胞培养:将地锦草的叶细胞置于培养基内部培养,使得叶细胞正常生长和繁殖并分泌细胞外囊泡; 所述地锦草的叶细胞置于培养基内部培养是以MS作为基本培养基在无菌条件下培养叶细胞,加入细胞分裂素、生产素和2,4-D生长调节剂,MS培养基的pH值调整至5.8-6.0,培养温度为20-28℃,蔗糖浓度为30gL,在叶细胞培养期间,其光照时长为12h,与黑暗时间交替进行,光照度为2500Lx; 步骤三,细胞外囊泡的分离和纯化:叶细胞在培养过程中会分泌细胞外囊泡,通过300-3500xg的速度逐级低速离心,去除未消化的细胞碎片和杂质,收集离心后的上清液,该上清液中包含了细胞外囊泡,以100000xg的速度超速离心,弃去上清液,用磷酸盐缓冲液重悬细胞外囊泡,将重悬后的细胞外囊泡加入装有60wt%、45wt%、30wt%蔗糖溶液的超速离心管中,然后在4℃下140000xg超速离心60-90min,吸取45wt%-30wt%之间的液体条带,使用PBS混合均匀,在4℃下150000xg继续超速离心60-90min除去蔗糖溶液,将所得沉淀使用PBS重悬即得到地锦草来源的细胞外囊泡,然后对细胞外囊泡表征,以确定其大小、形态、表面标记物的特征; 步骤四,收集提取细胞外囊泡液,放置于-20℃冰箱保存待用。
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