华中农业大学赵书红获国家专利权
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龙图腾网获悉华中农业大学申请的专利染色质和/或染色体构象捕获方法及其所用试剂获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116004768B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-05发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310145150.0,技术领域涉及:C12Q1/6806;该发明授权染色质和/或染色体构象捕获方法及其所用试剂是由赵书红;齐晓龙;付亮亮;张露;周鹏;赵秋林;李新云设计研发完成,并于2023-02-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本染色质和/或染色体构象捕获方法及其所用试剂在说明书摘要公布了:本发明公开了一种染色质和或染色体构象捕获的方法及其所用试剂,属于三维基因组学领域。该方法包括:将目的细胞进行体外交联、裂解、利用平末端限制性内切酶进行酶切在末端添加A碱基,用BPLinker连接邻位DNA末端;特异性抗体标记目的蛋白后利用Tn5融合蛋白靶向富集目的蛋白质介导的DNA相互作用,利用生物素标记富集“DNA‑标签‑DNA”的目的片段,得到邻位连接DNA片段,对邻位连接DNA片段进行测序分析,确定与目的蛋白结合的邻位连接DNA。本发明相较于传统方法,该方法具有使用常规实验器材和稀少细胞数量、高效、短周期、低数据信噪比低、低成本的优势。
本发明授权染色质和/或染色体构象捕获方法及其所用试剂在权利要求书中公布了:1.染色质和或染色体构象捕获的方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤: S1、将目的细胞进行体外交联,使目的细胞内与DNA结合的蛋白固定,得到固定后的目的细胞,收集固定后的目的细胞并用细胞裂解液裂解得到裂解物,从所述裂解物中获取目的细胞核;从所述裂解物中获取目的细胞核包括将所述裂解物加入含SDS的缓冲溶液在62℃孵育松散染色质后再加入TritonX-100中和SDS,所述含SDS的缓冲溶液中SDS的含量为3-5gL; S2、利用限制性内切酶将所述目的细胞核中的DNA进行酶切,使得目的细胞核具有平末端的DNA,在平末端的DNA的3’末端添加A碱基,得到具有A碱基末端的DNA的目的细胞核; S3、用T4DNA连接酶连接具有A碱基末端的DNA与BPLinker,得到含有邻位连接DNA的目的细胞核; 所述BPLinker是3’末端具有突出核苷酸T的粘性末端的双链DNA,所述BPLinker的一条链的核苷酸序列为序列表中的序列1,另一条链的核苷酸序列为序列表中的序列2,序列1的第10位的脱氧胸苷酸T被生物素修饰,所述BPLinker的两条链的每条链的两个核苷酸之间的3`,5`-磷酸二酯键均被替换为3`,5`-硫代磷酸二酯键; S4、捕获所述含有邻位连接DNA的目的细胞核,使抗目的蛋白的特异性抗体与所述含有邻位连接DNA的目的细胞核进行反应,得到结合一抗的目的细胞核,使所述结合一抗的目的细胞核与抗所述特异性抗体的二抗结合,得到结合一抗二抗的目的细胞核,使所述结合一抗二抗的目的细胞核与Tn5融合蛋白进行反应,得到原位标签化目的细胞核,所述原位标签化目的细胞核为结合所述Tn5融合蛋白的细胞核,用镁离子激活所述原位标签化目的细胞核中的所述Tn5融合蛋白,使与所述目的蛋白结合的邻位连接DNA被片段化,得到含有邻位连接DNA片段的目的细胞核,从所述含有邻位连接DNA片段的目的细胞核中提取纯化DNA,得到含有邻位连接DNA片段的混合DNA,从所述混合DNA中捕获所述邻位连接DNA片段,得到所述邻位连接DNA片段; S5、对所述邻位连接DNA片段进行测序分析,确定与所述目的蛋白结合的邻位连接DNA。
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