南昌大学陈晔光获国家专利权
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龙图腾网获悉南昌大学申请的专利胃癌类器官共培养模型的构建方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119876034B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510369296.2,技术领域涉及:C12N5/09;该发明授权胃癌类器官共培养模型的构建方法及应用是由陈晔光;钟南山;洪帆设计研发完成,并于2025-03-27向国家知识产权局提交的专利申请。
本胃癌类器官共培养模型的构建方法及应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种胃癌类器官共培养模型的构建方法及应用,该方法包括:步骤S1,对胃癌肿瘤组织进行预处理,然后采用细胞筛网支架爬出法从胃癌肿瘤组织中提取TRM细胞;步骤S2,从胃癌肿瘤组织中获取上皮细胞,通过三维培养构建胃癌类器官;步骤S3,将TRM细胞与胃癌类器官按不同比例混合,在含IL‑15、IL‑2的培养基中共培养,保持TRM细胞的基础代谢,得到胃癌类器官共培养模型。本发明能够更好的模拟TME中免疫微环境,从而更好的用于免疫治疗药物的开发。
本发明授权胃癌类器官共培养模型的构建方法及应用在权利要求书中公布了:1.一种胃癌类器官共培养模型的构建方法,其特征在于,包括: 步骤S1,对胃癌肿瘤组织进行预处理,然后采用细胞筛网支架爬出法从胃癌肿瘤组织中提取TRM细胞; 步骤S2,从胃癌肿瘤组织中获取上皮细胞,通过三维培养构建胃癌类器官; 步骤S3,将TRM细胞与胃癌类器官按不同比例混合,在含IL-15、IL-2的培养基中共培养,保持TRM细胞的基础代谢,得到胃癌类器官共培养模型; 步骤S1中,采用细胞筛网支架爬出法从胃癌肿瘤组织中提取TRM细胞,具体包括: 将组织小块置于100μm无菌细胞筛网内,用眼科镊摆放好正确位置,确保接触胃内容物一侧朝上; 在培养皿中预装7mL无细胞因子的培养基,无细胞因子的培养基的成分为:RPMI1640、10%胎牛血清和Primocin,放入细胞筛网-组织小块复合体,37°C培养36–48小时; 移除筛网后,收集网底脱落在培养皿底上的细胞,离心弃上清,使用冻存液梯度降温冻存; 步骤S2具体包括: 从胃癌肿瘤组织中提取上皮细胞,与基质胶混合,在人胃癌类器官培养基中三维培养7天,得到胃癌类器官,所述人胃癌类器官培养基的成分及含量为:GlutaMAX,1×;HEPESBuffer,10mM;Primocin,1×;N-乙酰半胱氨酸,1mM;N2,1×;B27,1×;Wnt3a,100-300ngmL;R-spondin1,1μgmL;骨形态发生蛋白拮抗剂Noggin,100ngmL;胃泌素蛋白Gastrin,10nM;表皮生长因子EGF,50ngmL;纤维生长因子FGF-10,100ngmL;TGF-βI型受体抑制剂A83-01,0.5μM;烟酰胺,10mM;ROCK通路抑制剂Y-27632,10μM; 步骤S3具体包括: 将稳定状态的胃癌类器官从孔板中刮下,洗涤后使用TrypLE消化成单细胞并计数; 复苏TRM细胞并计数,将TRM细胞与消化成单细胞的胃癌类器官上皮细胞按1:20的数量比例混合,重悬于基质胶中; 使用混合培养基维持TRM细胞基础活性,所述混合培养基是RPMI1640与不含Y-27632的人胃癌类器官培养基按1:1体积混合,并补充5IUmL的IL-2和1ngmL的IL-15得到; 每48-72小时更换混合培养基,维持TRM活性及胃癌类器官生长; 共培养类器官传代,弃去混合培养基后,用PBS轻柔洗下并收集共培养物,400g离心4分钟以避免TRM细胞丢失。
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