杭州师范大学刘俊秋获国家专利权
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龙图腾网获悉杭州师范大学申请的专利一种大肠杆菌中构建巨型细胞器增强[Fe-Fe]氢化酶耐氧性的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119592595B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411771010.5,技术领域涉及:C12N15/70;该发明授权一种大肠杆菌中构建巨型细胞器增强[Fe-Fe]氢化酶耐氧性的方法是由刘俊秋;李辉;于晓璇;孙鸿程;徐家云;鲍升;徐政伟设计研发完成,并于2024-12-04向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种大肠杆菌中构建巨型细胞器增强[Fe-Fe]氢化酶耐氧性的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种大肠杆菌中构建巨型细胞器增强[Fe‑Fe]氢化酶耐氧性的方法,属于酶催化技术领域。该方法包括如下步骤:构建能够在大肠杆菌中表达[Fe‑Fe]氢化酶和引导蛋白及[Fe‑Fe]氢化酶的促成熟蛋白的两个质粒;将两个质粒转化至大肠杆菌BL21DE3感受态细胞中,进行预培养;将预培养物转移至新培养基中,进行有氧培养,培养一段时间后,测定其OD600值,将培养物转移至厌氧手套箱中,厌氧培养,离心,得到含有巨型细胞器的大肠杆菌。本发明提供一种大肠杆菌中构建巨型细胞器增强[Fe‑Fe]氢化酶耐氧性的方法,通过在大肠杆菌中构建巨型细胞器,有效地增强了[Fe‑Fe]氢化酶的耐氧性和稳定性,为氢气的生产提供了一种新的可持续方法。
本发明授权一种大肠杆菌中构建巨型细胞器增强[Fe-Fe]氢化酶耐氧性的方法在权利要求书中公布了:1.一种大肠杆菌中构建巨型细胞器增强[Fe-Fe]氢化酶耐氧性的方法,其特征在于,包括如下步骤: S1、构建能够在大肠杆菌中表达[Fe-Fe]氢化酶和引导蛋白、[Fe-Fe]氢化酶的促成熟蛋白的两个表达质粒; S2、将S1中得到的两个质粒转化至大肠杆菌BL21DE3感受态细胞中,将其在3毫升LuriaBertani培养基中预培养6h,得到预培养物; S3、将S2中得到的预培养物以1:50转移至新的LuriaBertani培养基中,进行有氧培养,培养一段时间后,测定其OD600值,将培养物转移至厌氧手套箱中,加入诱导剂,在厌氧条件25℃下振荡培养20h,离心,得到含有巨型细胞器的大肠杆菌; S1中所述[Fe-Fe]氢化酶为HydA1,引导蛋白为CipA;[Fe-Fe]氢化酶的促成熟蛋白包括:HydE、HydF和HydG; S3中,所述诱导剂由2.5mmolL富马酸钠、2mmolLL-半胱氨酸、250μgmL柠檬酸铁铵及0.1mmolL异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷组成; S1、由空质粒pETDuet-1和pCDFDuet-1分别构建能够在大肠杆菌中表达[Fe-Fe]氢化酶HydA1和引导蛋白CipA及[Fe-Fe]氢化酶的促成熟蛋白HydE、HydF和HydG的两个质粒:pETDuet-1HydE+HydA-CipA和pCDFDuet-1HydF+HydG。
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