长江师范学院曾静获国家专利权
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龙图腾网获悉长江师范学院申请的专利一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115873894B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211682983.2,技术领域涉及:C12N15/82;该发明授权一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法是由曾静;刘义华;莫言玲;陈静静设计研发完成,并于2022-12-27向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法在说明书摘要公布了:本发明涉及茎瘤芥高效遗传转化技术领域,公开了一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法,包括一再生体系建立,采用添加6‑BA和NAA的培养基对茎瘤芥外植体进行诱导,获得茎瘤芥再生体系;二遗传转化体系建立,截取无菌的外植体置于含农杆菌的浸染液中浸染,并将浸染后的外植体经愈伤组织诱导‑不定芽分化‑生根培养‑炼苗,形成茎瘤芥遗传转化体系。本方案通过在再生体系建立时以不同浓度的6‑BA即6‑苄氨基嘌呤和NAA即α‑萘乙酸组合,对不同茎瘤芥外植体的诱导进行优化筛选,从而获得具有更高诱导率的6‑BA和NAA浓度组合,可获得诱导率高达86%的再生体系,从而便于显著提升茎瘤芥转化率。
本发明授权一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法在权利要求书中公布了:1.一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法,其特征在于:包括(一)再生体系建立,采用添加6-BA和NAA的培养基对茎瘤芥外植体进行诱导,获得茎瘤芥再生体系;(二)遗传转化体系建立,取无菌外植体置于含农杆菌的浸染液中浸染,并将浸染后的外植体经添加6-BA、NAA和抗生素的培养基进行诱导,获得茎瘤芥遗传转化体系; 所述遗传转化体系建立,包括如下步骤: 步骤一:播种,取灭菌的茎瘤芥种子播种于种子萌发培养基M1中; 步骤二:浸染,将外植体置于含农杆菌的浸染液中浸染;浸染液为采用30%无菌蔗糖溶液重悬含有p130035S-BjuSPL10c-GFP载体的农杆菌,浸染为将外植体置于OD600值为0.05 的浸染液中浸染10min; 步骤三:愈伤诱导,切取播种所得茎瘤芥的部分组织作为外植体接种于愈伤组织诱导培养基M2’中,诱导获得愈伤组织;所述M2’为MS+2mgL6-BA+0.15mgLNAA+20mgL潮霉素+500mgL特美汀+0.8%琼脂; 步骤四:不定芽诱导,将上述愈伤组织接种于新的愈伤组织诱导培养基M2’中继续培养,获得不定芽; 步骤五:生根诱导,将上述不定芽接种于生根培养基M3’中进行生根培养,获得再生苗;所述M3’为12MS+0.1mgLNAA+20mgL潮霉素+500mgL特美汀+0.8%琼脂; 步骤六:炼苗,将再生苗移栽至营养土中,获得再生植株,建立茎瘤芥遗传转化体系。
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