河南中医药大学程迪获国家专利权
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龙图腾网获悉河南中医药大学申请的专利基于PEI功能化GO和ROP双信号放大策略的高灵敏cTnI检测试剂盒及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116539689B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211640248.5,技术领域涉及:C12Q1/68;该发明授权基于PEI功能化GO和ROP双信号放大策略的高灵敏cTnI检测试剂盒及应用是由程迪;张亚萍;周振波;杨怀霞;刘艳菊设计研发完成,并于2022-12-20向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于PEI功能化GO和ROP双信号放大策略的高灵敏cTnI检测试剂盒及应用在说明书摘要公布了:本发明公开了基于PEI功能化GO和ROP双信号放大策略的高灵敏cTnI检测试剂盒及应用,该试剂盒包括:金电极、Apt1、MCH、Apt2‑GO‑PEI生物偶联物、NCA‑Fc。本发明基于PEI功能化的GO和ROP双信号放大策略,成功构建了一种新型电化学适配体检测试剂盒。Apt1探针通过Au‑S键自组装在金电极表面,通过特异性识别捕获cTnI。Apt2‑GO‑PEI生物偶联物作为ROP反应的大分子引发剂,NCA‑Fc作为ROP反应的单体,大量的电活性聚合物链通过氨基引发的ROP反应接枝到电极表面。PEI功能化的GO和NCA‑Fc的联合应用不仅保证了反应具有丰富的活性位点,而且大大提高了信号强度,提高了检测的灵敏度。同时本发明具有良好的选择性、重现性、稳定性和抗干扰性。
本发明授权基于PEI功能化GO和ROP双信号放大策略的高灵敏cTnI检测试剂盒及应用在权利要求书中公布了:1.基于PEI功能化GO和ROP双信号放大策略的高灵敏cTnI的非诊断和或治疗目的检测方法,其特征在于,使用的原料包括:金电极、Apt1、MCH、Apt2-GO-PEI生物偶联物、NCA-Fc; Apt1的序列为: 5’-SH-CH26-CGTGCAGTACGCCAACCTTTCTCATGCGCTGCCCCTCTTA-3’; Apt2-GO-PEI生物偶联物的制备方法为: 将4mgGO-PEI分散在2mLPBS缓冲液中,然后将200µL10µMApt2溶液加入上述分散液中,在37℃下孵育3h,将产物离心并洗涤,最后用PBS缓冲液重新分散离心产物,以获得均匀的Apt2-GO-PEI生物偶联物; Apt2的序列为:5’-CGCATGCCAAACGTTGCCTCATAGTTCCCTCCCCGTGTCC-3’ NCA-Fc的合成方法为: (1)称取二茂铁甲酸溶于DCM中,0℃条件下滴加三乙胺,再依次加入HBTU和HOBT,反应1h后,旋转蒸干,得到产物Fc-OBT; (2)将TFA在0℃条件下滴入Boc-L-LysNCA的DCM溶液中,反应1h后,移入室温搅拌过夜,得到NCA产物; (3)将三乙胺在0℃条件下滴入所制备的Fc-OBT中,然后加入所制备的NCA,室温反应2天,薄层色谱法监测反应过程,反应结束后进行后处理得到单体NCA-Fc; 所述检测方法包括以下步骤: (1)金电极的修饰和ROP反应 ①将Apt1溶液滴加到金电极上,反应,洗涤,吹干; ②将步骤①的电极浸泡在MCH溶液中,反应,洗涤,吹干; ③将待检测样品滴加至步骤②的电极表面,反应,洗涤,吹干; ④将Apt2-GO-PEI生物偶联物溶液滴加到步骤③的电极上,反应,洗涤,吹干; ⑤将NCA-Fc溶液滴加到步骤④的电极表面,反应,洗涤,吹干; (2)电化学检测 将修饰后的电极浸入LiClO4溶液中,通过方波伏安法记录电流响应,根据电信号大小分析cTnI含量。
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