宁波大学孙宗涛获国家专利权
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龙图腾网获悉宁波大学申请的专利点蜂缘蝽分泌蛋白RpSP4043及其在大豆“症青”防控中的应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115927357B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211211713.3,技术领域涉及:C12N15/12;该发明授权点蜂缘蝽分泌蛋白RpSP4043及其在大豆“症青”防控中的应用是由孙宗涛;胡彪;魏中艳;张合红;李雁军;陈剑平设计研发完成,并于2022-09-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本点蜂缘蝽分泌蛋白RpSP4043及其在大豆“症青”防控中的应用在说明书摘要公布了:本发明涉及一种点蜂缘蝽分泌蛋白基因RpSP4043的dsRNA合成以及该基因在大豆“症青”病害防控中的应用。
本发明授权点蜂缘蝽分泌蛋白RpSP4043及其在大豆“症青”防控中的应用在权利要求书中公布了:1.一种减轻或防治大豆“症青”的方法,将靶向RpSP4043基因的dsRNA喷洒大豆植株,所述dsRNA合成步骤如下: 1取点蜂缘蝽成虫唾液腺,Trizol法提取总RNA,反转录获得cDNA第一条链; 2以步骤1中获得的点蜂缘蝽cDNA为模板,以序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的上下游引物进行PCR扩增; 3将上述扩增获得的基因片段连接克隆载体pBinGFP,转化到大肠杆菌DH5α,在含有卡那霉素的LB固体培养基上培养,获得含有基因片段的单克隆菌落; 4挑取单克隆菌落在含有卡那霉素的LB液体培养基中扩大培养,抽提质粒,进行DNA测序,得到含有如SEQIDNO.1所示序列的Bin-RpSP4043; 5以Bin-RpSP4043质粒为模板,利用SEQIDNO.4所示的上游引物和SEQIDNO.5所示的下游引物进行PCR扩增,获得含有T7启动子的RpSP4043基因片段; 6以步骤5所述PCR扩增获得的基因片段为模板合成dsRNA,反应体系为:10×ReactionBuffer2μl,ATPsolution2μl,UTPsolution2μl,CTPsolution2μl,GTPsolution2μl,T7RNAPolymerase2μl,DNA模板1μg,RNase-freeH2O补齐至20μl,混匀,37℃反应8h; 7向体系中加入1μlDNase,37℃反应15min; 8取反应后的样品65℃变性5min,测定dsRNA浓度,并通过1%琼脂糖凝胶电泳确定RNA质量; 9将剩余dsRNA储存于-80℃备用。
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