深圳小洲生态环境有限公司伍娥获国家专利权
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龙图腾网获悉深圳小洲生态环境有限公司申请的专利一种古树名木中炭疽菌的快速检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115558699B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202110747665.9,技术领域涉及:C12Q1/04;该发明授权一种古树名木中炭疽菌的快速检测方法是由伍娥;昝欣;丁明艳;胡长云;周德立;陈朝超;伍洲洲设计研发完成,并于2021-07-01向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种古树名木中炭疽菌的快速检测方法在说明书摘要公布了:本发明旨在解决古树名木中炭疽菌检测效率低、检测结果不准确、检测成本高昂、操作繁琐费时等问题,提供了一种古树名木中炭疽菌的快速检测方法,通过快速有效的体外培养炭疽菌,大大提高了炭疽菌侵染初期时的检出率;通过设计专门的培养基、振荡培养、两次增菌处理、超声波处理、酸化处理、蓝光照射处理等手段,极大的提高了古树名木中炭疽菌的体外培养效率,并通过最后的刚果红染色,准确有效地检测出炭疽菌。
本发明授权一种古树名木中炭疽菌的快速检测方法在权利要求书中公布了:1.一种古树名木中炭疽菌的快速检测方法,其特征在于:包括以下步骤: 1、配置专用培养基:取去皮马铃薯250g,粉碎后,加入蒸馏水1000ml、葡萄糖35g、木屑50g、麦皮20g、琼脂30g、碳酸钙10g,调整pH至7.5,于121℃灭菌30min,冷却至常温备用; 2、振荡培养:取古树名木发生异常的两片叶子,粉碎处理后,置于含有1L上述专用培养基的培养瓶中,500rpm条件下振荡培养6h,培养温度为38℃; 3、首次增菌:向培养瓶中加入增菌营养剂100ml,在30℃条件下培养2h,所采用的增菌营养剂配方为:按重量份计,18%蛋白胨、5%菊芋粉、1%低聚己糖、1%丙酮酸钠、0.5%盐酸吡哆醇、1.2%枸橼酸铁铵、1.5%氯化钾,其余为蒸馏水;增菌营养剂使用前121℃灭菌30min; 4、超声波处理:采用频率为10KHz的超声波对培养混合物进行处理,处理时间为3min; 5、酸化处理:向培养瓶中的培养混合物中加入醋酸10ml,摇匀后,静置培养1h; 6、二次增菌:向培养瓶中加入增菌营养剂60ml,在33℃条件下培养2h,所采用的增菌营养剂配方为:按重量份计,12%酵母粉、3%菊芋粉、1%亚硒酸钠、0.1%乙酰胆碱、1.5%氯化锂、0.5%磷酸氢二钠,其余为蒸馏水;增菌营养剂使用前121℃灭菌30min; 7、蓝光照射:用蓝光灯照射培养混合物20min,所采用蓝光灯的波长为400~450nm,光照强度为800~900lx; 8、黑暗处理:蓝光照射后,将培养瓶置于完全黑暗条件下静置20min; 9、pH调整:将黑暗处理后的培养瓶取出,用质量分数为10%的盐酸溶液调整其pH到7.5; 10、染色:吸取少量的培养混合物,置于洁净的培养皿中,在培养皿下方通过微火3-4次,使培养皿中的水分蒸干,冷却后,在培养皿中滴加适量的刚果红染色剂,常温避光放置30min,然后倒掉染液,用蒸馏水多次轻轻清洗培养皿,至水中无染液的颜色为止;用吸水纸吸取多余水分,显微观察培养皿,如果出现了透明圈,则断定古树名木感染了炭疽菌。
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