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龙图腾网获悉恢春丹生物科技(海南)有限公司申请的专利一种用于抗衰老的干细胞外泌体的培养方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120137892B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510591693.4，技术领域涉及：C12N5/0775；该发明授权一种用于抗衰老的干细胞外泌体的培养方法及其应用是由郑宝权;赵玲;郑金昕;孙滨;郑菲设计研发完成，并于2025-05-09向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种用于抗衰老的干细胞外泌体的培养方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明属于生物医药或保健品领域，具体公开了一种用于抗衰老的干细胞外泌体培养方法及其应用。所述方法通过低氧（5%‑8%O₂）预培养联合旋转式三维动态培养，显著提升外泌体产量至2.1×1011particlesmL；分阶段添加TGF‑β1、IFN‑γ及NMN，协同激活免疫调节通路，使TGF‑β1含量达8.5ngμg。外泌体与活性成分（维生素C乙基醚、Q10、虾青素）共同包埋于脂质体（HSPC:胆固醇=7:3）中，口服后胃液稳定性达92.3%，肠道吸收率提升至80%。实验表明，该组合物可提高老年小鼠脾脏Treg比例35%，降低IL‑6水平48%，并改善皮肤屏障功能（TEWL降低40%）。长期毒性实验证实其安全性（ALT无异常）。本发明在抗衰老领域具有显著的技术进步和临床应用潜力。

本发明授权一种用于抗衰老的干细胞外泌体的培养方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种用于抗衰老的干细胞外泌体的培养方法，其特征在于，包括以下步骤： （a）将间充质干细胞以5×104-1×105cellscm2的接种密度接种于含5%-10%血清替代物的DMEMF12培养基中，在氧气浓度为5%-8%的低氧环境下预培养24-48小时； （b）向培养基中添加细胞因子组合，所述细胞因子组合为终浓度为10-20ngmL的TGF-β1、5-15ngmL的IFN-γ及1-5μM的烟酰胺单核苷酸NMN； （c）将培养体系转移至旋转式生物反应器中，以0.5-2rpm的转速进行动态三维培养72-120小时，控制温度为37±0.5℃，并通过CO2缓冲系统维持pH值在7.2-7.4； （d）收集培养上清液，依次通过2000×g离心10-20分钟去除细胞碎片、100,000×g超速离心1-2小时富集外泌体，再经尺寸排阻色谱柱SepharoseCL-4B纯化，获得粒径为50-150nm的外泌体悬液； （e）将步骤（d）所得外泌体悬液与冻干保护剂按体积比1:1混合，所述冻干保护剂为5wt%海藻糖、2wt%甘露醇及0.1wt%人血清白蛋白HSA，经预冻-80℃,2小时后，在真空度≤10Pa、冷阱温度-50℃条件下冷冻干燥24-36小时，获得干细胞外泌体冻干粉，复溶后蛋白回收率≥85%； 步骤（a）中的培养基中添加有0.1-0.5mM的抗氧化剂没食子酸丙酯PG； 步骤（b）中所述细胞因子组合的添加方式为分阶段脉冲式添加，具体为：在第0小时加入TGF-β1，在第24小时加入IFN-γ，并在第48小时补充NMN； 步骤（c）中所述旋转式生物反应器的内壁涂覆有胶原蛋白和透明质酸复合支架，支架孔隙率为80-90%； 步骤（d）中所述尺寸排阻色谱的洗脱液为含1%人血清白蛋白HSA的PBS缓冲液，洗脱流速为0.5-1mLmin。

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