东阿阿胶股份有限公司折改梅获国家专利权
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龙图腾网获悉东阿阿胶股份有限公司申请的专利一种中药靶向质量标志物筛选方法及党参靶向Q-Marker的应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118866077B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410778595.7,技术领域涉及:G16B15/30;该发明授权一种中药靶向质量标志物筛选方法及党参靶向Q-Marker的应用是由折改梅;宋若兰;吕芳;张凤;张燕;程杰;王延涛;刘海滨;齐晓丹;孔令梅;张淹;阚士东;邓清月;刘薇设计研发完成,并于2024-06-17向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种中药靶向质量标志物筛选方法及党参靶向Q-Marker的应用在说明书摘要公布了:本发明涉及中药靶向筛选技术领域,提出了一种中药靶向质量标志物筛选方法,包括以下步骤:S1、热点聚焦:提取中药主要药理活性的共同热点通路和靶点,结合多种算法筛选关键靶点并圈定靶向Q‑Marker潜在范围;S2、虚拟双向垂钓:利用分子对接虚拟双向垂钓成分和靶点;S3、真实垂钓:制备并表征靶点的功能化磁性纳米颗粒,通过真实垂钓得到成分,对垂钓结果检测,确定靶向Q‑Marker。通过上述技术方案,解决了相关技术中准确性、效率和经济性均较低的问题,提供了更为精准的筛选结果、更为高效的筛选过程及更为经济的筛选方式。
本发明授权一种中药靶向质量标志物筛选方法及党参靶向Q-Marker的应用在权利要求书中公布了:1.一种中药靶向质量标志物筛选方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、热点聚焦:提取中药药理活性的共同热点通路和靶点,筛选关键靶点并圈定靶向Q-Marker潜在范围; S2、虚拟双向垂钓:利用分子对接虚拟双向垂钓成分和靶点; S3、真实垂钓:制备并表征靶点的功能化磁性纳米颗粒,通过真实垂钓得到成分,对垂钓结果检测,确定靶向Q-Marker; 所述步骤S1包括: A1、热点通路和靶点的提取:以中药名称为关键词在文献数据库中进行检索并收集文献信息,去重后导出包含文献信息的文件,整理发文量、文章所属学科、关键词、发文年限,导入文献计量学分析软件,提取数据,选择与药理学研究类的关键词进行可视化分析,确定与中药多种功效相关的作用机制中的热点通路和靶点; A2、关键靶点的筛选:在靶点信息数据库中获取热点通路和靶点的相关靶点,将靶点名称标准化,收集靶点信息,通过数据库获取蛋白互作网络信息,实现网络拓扑参数分析,对各靶点的多种网络拓扑参数进行计算并依据靶点得分进行可视化分析,选择PPI网络中得分排名靠前的靶点作为关键靶点; A3、靶向Q-Marker潜在范围的确定:结合成分数据库和文献收集与中药质量控制成分,收集各成分吸收、分布、代谢与排泄的参数数据,导入软件,并进行聚类,依据聚类结果分析不同类别成分的ADME特征,获取成分靶点信息,将靶点信息标准化,关注相关靶点与A2所得关键靶点重复率高的成分,并进一步结合成分所属类别的ADME特征,选择成分作为靶向Q-Marker潜在范围; 所述步骤S2包括: B1、分子对接:分别准备A2的关键靶点与包含在A3的靶向Q-Marker潜在范围内成分的结构文件,导入分子对接软件,进行对接,可视化分析对接效果; B2、算法分析:依据B1中的对接结果数据,对各成分进行打分,根据分数分类,得到优秀类别的成分,进一步将对接结果数据及成分类别标签导入软件,分析筛选与优秀类别的成分关联密切的靶点; 所述步骤S3包括: C1、功能化磁性纳米颗粒的制备:取纳米级Fe3O4,加适量入无水乙醇、去离子水,完全分散后,边搅拌边加入氨水、硅酸四乙酯,反应结束后,磁吸,移除反应溶剂,下层固体用超纯水洗涤至中性,再用无水乙醇洗涤,进行真空干燥,得到Fe3O4@SiO2,取Fe3O4@SiO2,加入无水乙醇,分散均匀后,边搅拌边加入3-氨丙基三乙氧基硅烷,反应结束后磁性分离,下层固体用无水乙醇和超纯水分别洗涤,磁性分离后真空干燥,得到Fe3O4@SiO2-NH2,取Fe3O4@SiO2-NH2,加入无水乙醇、磷酸缓冲盐溶液,分散均匀,加入50%戊二醛溶液,混合均匀,反应结束后磁性分离,磷酸缓冲盐溶液清洗,加入缓冲液,均匀分散,加入B2筛选所得靶点蛋白溶液,反应结束后磁性分离,用缓冲液洗涤,剩余固体即为功能化磁性纳米颗粒,储存在4℃的适宜缓冲液中备用;所述适宜缓冲液为三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液; C2、靶点蛋白的固定化产率测定:采用2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠蛋白试剂盒测定靶点蛋白的固定化产率,将标准品用缓冲液分别稀释成系列不同浓度的标准品溶液,取C1制备得到的Fe3O4@SiO2-NH2和功能化磁性纳米颗粒,加入缓冲液作为样品溶液,在各标准品溶液和样品溶液中加入2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠工作液,37℃孵育30min,用酶标仪测定562nm的吸光值,建立标准曲线,计算蛋白浓度与固定化产率; C3、材料表征:利用傅里叶变换红外光谱仪和扫描电子显微镜对C1中Fe3O4、Fe3O4@SiO2、Fe3O4@SiO2-NH2和功能化磁性纳米颗粒进行表征,对比分析功能化磁性纳米颗粒的特点; C4、配体垂钓:取B2中优秀类别的各成分,加甲醇制成混合溶液作为样品溶液,将C1中的Fe3O4@SiO2-NH2和功能化磁性纳米颗粒分别与等量样品溶液混匀,孵育并磁性分离,弃去上清液,用缓冲液洗涤,加入解离液,均匀混合,解离后磁性分离,得到洗脱液,过微孔滤膜备用;所述优秀类别的各成分为:党参炔苷、党参炔醇、党参炔苷宁、木犀草苷、紫丁香苷和芹菜素-7-O-葡萄糖苷; C5、垂钓结果检测及靶向Q-Marker的确定:分别精密吸取C4中垂钓前的样品溶液和垂钓后的洗脱液,注入高效液相色谱仪进行分析,对比垂钓前后各成分的峰面积,计算成分垂钓率,筛选成分垂钓率符合Q-Marker五原则的成分作为中药靶向Q-Marker。
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