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龙图腾网获悉扬州大学申请的专利一种基于Au@CuZn-ZIF纳米酶探针的化学发光成像免疫检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116482351B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310413968.6，技术领域涉及：G01N33/535；该发明授权一种基于Au@CuZn-ZIF纳米酶探针的化学发光成像免疫检测方法是由杨占军;姜国敏;李娟;石凤;吉爽爽;孟广宇设计研发完成，并于2023-04-18向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于Au@CuZn-ZIF纳米酶探针的化学发光成像免疫检测方法在说明书摘要公布了：本发明涉及免疫学分析检测技术领域内一种基于Au@CuZn‑ZIF纳米酶探针的化学发光成像免疫检测方法，首先制备Au@CuZn‑ZIF纳米酶并在其表面修饰羧基，连接二级抗体Ab2制得Au@CuZn‑ZIF‑Ab2纳米酶探针；然后将抗原分子和Au@CuZn‑ZIF‑Ab2纳米酶探针滴加到一级抗体Ab1修饰的环氧基活化载体片表面，温育形成三明治夹心的化学发光成像免疫传感器，实现对抗原分子的高灵敏检查。本发明中，将Au@CuZn‑ZIF纳米酶具有的类过氧化物酶活性可催化过氧化氢生成强氧化性羟基自由基触发鲁米诺产生化学发光信号，利用化学发光信号与抗原浓度之间的线性关系可实现抗原的检测。同时Au@CuZn‑ZIF纳米酶中铜离子的引入增强了复合材料的类酶催化活性与稳定性，再结合三明治夹心法，提高了蛋白质分子检测的灵敏度和特异性。

本发明授权一种基于Au@CuZn-ZIF纳米酶探针的化学发光成像免疫检测方法在权利要求书中公布了：1.一种基于Au@CuZn-ZIF纳米酶探针的化学发光成像免疫检测方法，其特征在于，通过如下步骤制备得到： 第1步，制备Au@CuZn-ZIF纳米酶并在其表面修饰羧基，连接二级抗体Ab2制得Au@CuZn-ZIF-Ab2纳米酶探针，包括如下分步： 1.1首先将ZnNO32·6H2O和CuNO32·3H2O溶于甲醇中形成A液，再将2-甲基咪唑溶于甲醇中形成B液，将A液逐滴滴加入B液，常温搅拌反应30-60min，然后离心收集并洗涤混合液中的固相产品，得到CuZn-ZIF纳米粒子； 1.2将CuZn-ZIF纳米粒子溶于水形成溶液，加入到嵌段式聚醚F-127水溶液中，常温搅拌30-60min，加入HAuCl4溶液，再常温搅拌30-60min后加入NaBH4溶液，继续搅拌两个小时，然后离心收集洗涤混合液中的固相产品，得到Au@CuZn-ZIF纳米酶； 1.3将Au@CuZn-ZIF纳米酶溶于磷酸缓冲溶液中，加入11-疏基十一烷酸（MUA）溶液以在Au@CuZn-ZIF表面修饰羧基，接着用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合溶液活化羧基，再加入二级抗体，4℃下搅拌3h，然后继续在4℃下离心洗涤，得到Au@CuZn-ZIF-Ab2纳米酶探针，分散于磷酸缓冲溶液中低温储藏； 第2步，将抗原分子和Au@CuZn-ZIF-Ab2纳米酶探针滴加到一级抗体Ab1修饰的环氧基活化载体片表面，温育形成三明治夹心的化学发光成像免疫传感器，实现对抗原分子的检查，包括以下分步骤： 2.1利用丝网印刷技术并借助模板在环氧硅烷化的载玻片表面制作反应微孔阵列； 2.2将一级抗体Ab1溶液与壳聚糖溶液混合，振荡均匀后滴入反应阵列的微孔中，在4℃下保存12小时； 2.3在微孔表面滴加牛血清白蛋白溶液，于4℃环境中密封温育12小时封闭未结合位点，然后用磷酸盐缓冲溶液冲洗并在室温下晾干； 2.4在不同的微孔表面分别滴加一系列已知浓度的抗原溶液与未知浓度的抗原溶液分别与Ab1反应，室温温育半个小时，然后用磷酸盐缓冲溶液冲洗并在室温下晾干； 2.5在微孔表面滴加Au@CuZn-ZIF-Ab2纳米酶探针与抗原反应，室温下温育半个小时，然后用磷酸盐缓冲溶液冲洗并在室温下晾干； 2.6配制发光底物，滴入微孔表面，即时放入全自动发光成像系统检测发光强度； 2.7根据已经已知浓度的抗源溶液对应的2.6分步中发光强度的检测，描制发光信号与抗原浓度之间线性关系的标准曲线；再将未知抗源浓度对应的发光强度对应描点制所述标准曲线对应的坐标位置，确定抗原浓度。

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