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龙图腾网获悉上海宏序生物科技有限公司申请的专利一种5’瓣状核酸酶介导的等温扩增方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116064745B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210813606.1，技术领域涉及：C12Q1/6848；该发明授权一种5’瓣状核酸酶介导的等温扩增方法是由李静;张璐璐;查洋;陈银萨;蒋广志;陈金萨设计研发完成，并于2022-07-12向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种5’瓣状核酸酶介导的等温扩增方法在说明书摘要公布了：本发明是一种等温扩增方法，利用Taq酶的5’瓣状核酸内切酶的特性，释放出互补配对的适配子；适配子之间互补扩增补齐缺口；全长适配子解链后的单链可识别体系中环装质粒目的区域，在等温扩增酶的作用下进行等温扩增；本方法包括引物组、适配子序列、探针序列、外源环状质粒；所用酶包括taq酶、Bst酶等，本发明优点在于：减少引物对，降低设计难度；2.特异性高，假阳性率低；3.设计简单，可规模化检测；方便拓展应用范畴。

本发明授权一种5’瓣状核酸酶介导的等温扩增方法在权利要求书中公布了：1.一种5’瓣状核酸酶介导的等温扩增方法，利用Taq酶的5’瓣状核酸内切酶的特性，释放出互补配对的适配子；适配子之间互补扩增补齐缺口；全长适配子解链后的单链可识别体系中环装质粒目的区域，在等温扩增酶的作用下进行等温扩增；具体步骤如下： 步骤A：设计引物集合： a.针对目的基因设计引物，引物包含两对，分别为AB和CD； b.所述的AB为外侧双向引物，引物长度为10-60nt，AB引物序列与外源质粒无识别区域；扩增子长度无限定； c.所述的CD为内侧双向引物，CD引物5’端分别为探针PCPD序列；3’端为目的基因锚定引物C’和D’；CD引物为大于等于1对； 所述的C’D’3’端1-5个碱基与目的基因不同，达到阻断延伸的作用； 所述的探针PC包括两部分序列，外源质粒识别序列C1和适配子序列1； 所述的探针PD包括两部分序列，外源质粒识别序列D1和适配子序列2； 所述的C1和D1为外源质粒识别序列，识别外源质粒特异性序列，外源质粒识别序列长度为10-60nt； 适配子序列1和适配子序列2为反向互补序列，其序列在目的基因及外源质粒上没有识别区域，序列长度为10-60nt； d.外源质粒选择：选择适合的环状质粒作为外源质粒，用于等温扩增 步骤B目的基因识别及探针置换、延伸，形成外源质粒识别结构 a.获得需要检测的样本DNARNA用于后续检测； b.AB引物对识别目的基因位点，并结合在目的基因上，在taq酶的作用下开始扩增，所述的taq酶为具有5’瓣状核酸内切酶活性的DNA聚合酶； c.CD引物对的3’端C’、D’序列分别识别目的基因位点，CD引物的PCPD序列分别被切割并释放出来； 所述的CD识别区域位于AB引物对的扩增范围内，且CD识别区域的5'侧序列与靶序列特异性结合； d.PCPD序列3’端互补，在taq酶作用下延伸补平，形成双链DNA结构PCPD； 步骤C探针识别及等温扩增 a.双链DNA结构PCPD双链变性恢复单链PCPD； b.PCPD分别退火识别并结合外源环状质粒特异性位点； c.滚环扩增； d.鉴定扩增结果。

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