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龙图腾网获悉江苏省农业科学院申请的专利一种从玻璃化冷冻囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干细胞的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114836374B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210457597.7，技术领域涉及：C12N5/0735；该发明授权一种从玻璃化冷冻囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干细胞的方法是由赵芳;王慧利;高运东;丁强;陈坤琳;夏淑雯;钱勇;仲跻峰设计研发完成，并于2022-04-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种从玻璃化冷冻囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干细胞的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种从玻璃化冷冻囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干细胞的方法。本发明采用冷冻囊胚与胚胎干细胞衍生阶段特定培养液相结合，建立一种稳定的奶牛胚胎干细胞衍生体系，其囊胚粘附生成outgrowth的概率≥80％，胚胎干细胞建系效率≥50％。利用本发明，解决了利用鲜胚衍生奶牛胚胎干细胞时效紧迫的问题，提高了奶牛胚胎干细胞建系效率及稳定性，有助于高效建立体外育种模型，加快育种进程，降低育种成本，对奶牛新品种系培育具有重要的实践价值。

本发明授权一种从玻璃化冷冻囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干细胞的方法在权利要求书中公布了：1.一种从玻璃化冷冻囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干细胞的方法，其特征在于在复苏的荷斯坦牛玻璃化冷冻囊胚进行衍生的三个阶段分别使用特定的细胞培养液进行培养；第Ⅰ阶段：分离囊胚内细胞团至贴附阶段，使用Ⅰ型细胞培养液进行培养,Ⅰ型细胞培养液配方为：改良mTeSR培养基+8-10%FBS+10-15μMY27632；第Ⅱ阶段：内细胞团贴附至细胞传代阶段，待细胞贴附后，将细胞培养液更换为Ⅱ型细胞培养液，继续培养3-5天使细胞团形成体外衍生物（outgrowth），对体外衍生物用TrypLE消化2-3min，加入DPBS终止消化，并用移液器轻轻吹打成小细胞团，离心去除上清，加入第Ⅰ阶段培养液，吹打均匀后接种于MEF饲养层上，放入37℃、5%CO2培养箱中培养24h，所述的Ⅱ型细胞培养液：改良mTeSR培养基+8-10%FBS；第Ⅲ阶段：传代24h后细胞培养阶段，使用Ⅲ型细胞培养液：改良mTeSR培养基+3-8%KSR；所述的改良mTeSR培养基是以在mTeSR1培养基的基础上添加终浓度为0.979mMGABA、0.984μMPipecolicAcid、0.98mMLiCl、20ngmLActivinA、20ngmLhumanFGF2、0.1mMβ-巯基乙醇和2.5μMIWR1配制而成。

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