浙江大学;良渚实验室王永成获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江大学;良渚实验室申请的专利基于水凝胶微球的微生物单细胞转录组测序方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118910237B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-15发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410993611.4,技术领域涉及:C12Q1/6869;该发明授权基于水凝胶微球的微生物单细胞转录组测序方法是由王永成;王钰婷;唐政敏设计研发完成,并于2024-07-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于水凝胶微球的微生物单细胞转录组测序方法在说明书摘要公布了:本发明公开了基于水凝胶微球的微生物单细胞转录组测序方法,涉及单细胞测序领域,能够以较低的微生物数量实现测序流程,对于较少微生物数量的样本提供了高通量单细胞测序的可能,解决了因微生物样本损失造成的结果偏差。本发明方法包括:将微生物样本固定,固定后的微生物样本制备为水凝胶微球,在微球内部对微生物细胞的RNA进行cDNA合成,并对cDNA进行标记,对标记后的cDNA建库和测序,得到微生物单细胞的转录组信息。其中所述微球为多孔网络状结构,表面的孔洞能通过蛋白、试剂,阻拦微球内的微生物个体。
本发明授权基于水凝胶微球的微生物单细胞转录组测序方法在权利要求书中公布了:1.基于水凝胶微球的微生物单细胞转录组测序方法,其特征在于,包括: 将待测微生物样本固定后包裹在水凝胶微球中; 在微球内部对单个微生物细胞的RNA进行cDNA合成,并对cDNA进行标记;对所述cDNA建库和测序,得到所述微生物单细胞的转录组信息; 所述测序方法具体包括以下步骤: 将所述微生物样本制备成单细胞悬液,与固定剂均匀混合,得到固定的微生物样本; 将所述固定后的微生物样本和水凝胶溶液混合,得到含有微生物样本的水凝胶溶液; 将所述含有微生物样本的水凝胶溶液制备为油包水液滴,再将液滴中的水凝胶溶液凝固; 将所述油包水液滴破乳,清洗后得到包裹微生物样本的所述微球; 对所述微球中的微生物样本的细胞壁进行消化裂解,使得试剂能通过细胞壁,进入微生物样本的细胞内部; 将反转录引物在所述微生物细胞的RNA上进行原位反转录反应合成cDNA的第一条链,再对所述cDNA进行标记; 溶解所述微球,对从所述微球中释放的cDNA进行纯化,对纯化后的cDNA进行建库和测序,得到所述微生物单细胞的转录组信息; 其中,所述微球中没有或只有一个微生物,所述微球为多孔网络状结构,表面的孔洞能通过试剂,阻拦微球内的微生物个体; 所述水凝胶溶液的制备方法如下: 将7.5μL质量浓度40%的丙烯酰胺溶液、2.5μL质量浓度5%的N,N'-双丙烯酰胱胺溶液、2.5μL质量浓度10%的过硫酸铵溶液、15μL的PBS混合后补超纯水到50μL; 或将15μL质量浓度40%的丙烯酰胺溶液、1.25μL质量浓度5%N,N'-双丙烯酰胱胺溶液、2.5μL质量浓度10%过硫酸铵溶液、15μL的PBS混合后补超纯水到50μL; 或将7.5μL质量浓度40%的丙烯酰胺溶液、3.75μL质量浓度5%N,N'-双丙烯酰胱胺溶液、2.5μL质量浓度10%过硫酸铵溶液、15μL的PBS混合后补超纯水到50μL; 或将1.5%浓度的低熔点琼脂糖,在85℃,10min条件下充分溶解后,降至37℃。
如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人浙江大学;良渚实验室,其通讯地址为:310012 浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。
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