安徽大学绿色产业创新研究院施昊获国家专利权
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龙图腾网获悉安徽大学绿色产业创新研究院申请的专利一种贻贝蛋白的生物转化生产方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115747246B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-15发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211423770.8,技术领域涉及:C12N15/81;该发明授权一种贻贝蛋白的生物转化生产方法是由施昊;张义玲;罗学才;尹若春设计研发完成,并于2022-11-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种贻贝蛋白的生物转化生产方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种贻贝蛋白的生物转化生产方法,涉及基因工程、发酵工程与应用生物学领域,具体步骤为:1构建包含贻贝蛋白前体的工程菌株;2将所述工程菌株经过活化和扩大化培养后进行蛋白发酵表达,发酵结束后,破碎菌体,使用亲和层析柱纯化发酵产物,获得纯化产物;3将所述纯化产物加入复合转化酶体系,进行酶转化,酶转化结束后,使用亲和层析柱,分离纯化转化产物,将纯化产物冷冻干燥,溶于酸性溶液中,获得贻贝蛋白。整个贻贝蛋白合成及重组过程中,真核生物的表达量高,发酵液中目标产物浓度大,经酶法重组后贻贝蛋白的生物学活性与天然贻贝蛋白类似。
本发明授权一种贻贝蛋白的生物转化生产方法在权利要求书中公布了:1.一种贻贝蛋白的生物转化生产方法,其特征在于,具体包括以下步骤: (1)根据贻贝蛋白前体表达菌株的密码子偏好性设计贻贝蛋白前体氨基酸序列的编码基因序列,所述贻贝蛋白前体表达菌株为酵母菌(Saccharomyces),所述贻贝蛋白前体氨基酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示,将基因序列连接至PET28a载体上并转入大肠杆菌DH5α中,经过筛选扩培,抽提质粒并进行双酶切验证、回收,获得目的序列,将目的序列连接到载体质粒上,转化受体菌,获得工程菌株; (2)将所述工程菌株经过活化和扩大化培养后进行发酵表达,发酵结束后,破碎菌体,使用亲和层析柱纯化发酵产物,获得纯化产物; (3)将所述纯化产物加入复合转化酶体系,进行酶转化,所述复合转化酶系组成按质量比,包括以下任意一种:(a)辣根过氧化物酶:葡萄糖氧化酶:SOD酶=1:1:2;(b)锰过氧化氢酶:SOD酶:酪氨酸酶=1:2:2;(c)VC氧化酶:葡萄糖氧化酶:SOD酶=2:2:1;(d)辣根过氧化物酶:锰过氧化氢酶:葡萄糖氧化酶=2:1:3,酶转化结束后,使用亲和层析柱,分离纯化转化产物,将纯化产物冷冻干燥,溶于1%柠檬酸溶液中,获得贻贝蛋白。
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