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龙图腾网获悉武汉科技大学申请的专利大队列样本单细胞富集和混样建库测序方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114891856B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-15发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210530632.3，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权大队列样本单细胞富集和混样建库测序方法是由周经姣;杨程;王仲怡;王毅;周俊;王玉蝶;晏晴设计研发完成，并于2022-05-16向国家知识产权局提交的专利申请。

本大队列样本单细胞富集和混样建库测序方法在说明书摘要公布了：本发明公开一种大队列样品单细胞富集和混样建库测序方法，包括如下步骤：S1、形成多来源的单细胞样品；S2、对不同来源的单细胞样品分别进行生物素抗体孵育、链霉亲和素偶联寡核苷酸标记，然后多样品混合形成混合样品；S3、制备3’转录组cDNA样品和标记DNA样品；S4、构建3’转录组文库；S5、构建标记DNA文库；S6、将3’转录组文库和标记DNA文库合并进行测序分析。本发明提供的单细胞富集、链霉亲和素偶联寡核苷酸标记样品、单细胞转录组混样建库测序及分析的技术方法，适用于感染性疾病、炎症、肿瘤等大队列样本研究和稀有细胞群体研究。

本发明授权大队列样本单细胞富集和混样建库测序方法在权利要求书中公布了：1.一种大队列样品单细胞富集和混样建库测序方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、自不同来源的血液或骨髓或瘤体组织样本中分离富集目的细胞，形成单细胞样品； S2、对步骤S1获得的多样本来源的单细胞样品进行生物素抗体孵育，并通过链霉亲和素偶联寡核苷酸标记各样品，然后将不同来源的样品混合形成混合样品； S3、将混合样品放入ChromiumController中获得GEMs，再对GEMs进行逆转录反应，获得DNA溶液，然后在得到的DNA产物中加入PCRmix、转录组cDNA引物和标记DNA引物进行扩增反应，并通过琼脂糖凝胶电泳分离回收标记DNA样品和3’转录组cDNA样品； S4、利用3’转录组cDNA样品进行接头连接和文库测序索引PCR反应，构建3’转录组文库； S5、利用标记DNA样品进行文库测序索引PCR反应，构建标记DNA文库； S6、按照测序平台的要求对3’转录组文库和标记DNA文库进行变性和稀释，并对3’转录组文库和标记DNA文库合并进行测序； 步骤S1中单细胞样品为肿瘤组织TIL细胞、循环肿瘤细胞、血液或骨髓单个核细胞、血液或骨髓中的NK稀有细胞，其中一种富集形成； 步骤S2中采用biotin-conjugated抗体对步骤S1获得的单细胞样品进行生物素抗体孵育： 单细胞样品由肿瘤组织TIL细胞形成时，biotin-conjugated抗体为biotin-conjugatedCD3抗体； 单细胞样品由循环肿瘤细胞形成时，biotin-conjugated抗体为biotin-conjugatedpanCK抗体，其中包括CK8、CK18和CK19； 单细胞样品由血液或骨髓单个核细胞形成时，biotinconjugated抗体为biotin-conjugatedCD45抗体； 单细胞样品由血液或骨髓中的NK稀有细胞形成时，biotin-conjugated抗体为biotin-conjugatedCD56抗体； 步骤S2中加入的链霉亲和素偶联寡核苷酸的序列为SEQIDNO.1~SEQIDNO.12。

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