北京航空航天大学杭州创新研究院;杭州乐为生医科技有限公司高阳获国家专利权
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龙图腾网获悉北京航空航天大学杭州创新研究院;杭州乐为生医科技有限公司申请的专利一种基于邻位连接的多靶标同时检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120102908B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-19发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510595605.8,技术领域涉及:C12Q1/6804;该发明授权一种基于邻位连接的多靶标同时检测方法是由高阳;韩改净设计研发完成,并于2025-05-09向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于邻位连接的多靶标同时检测方法在说明书摘要公布了:本发明属于生物检测技术领域,具体涉及一种基于邻位连接的多靶标同时检测方法,包括采用包被了识别不同靶标的抗体的多种微珠来同时富集多种靶分子,并与邻位探针结合,随后使用夹板探针来连接处于邻位的探针,最后通过qPCR检测实现了多种不同靶分子的检测;本发明的方法不仅可以同时检测多种不同的靶分子,而且与常规方法相比具有更高的检测准确度。
本发明授权一种基于邻位连接的多靶标同时检测方法在权利要求书中公布了:1.一种基于邻位连接的多靶标同时检测方法,其特征在于,包括以下步骤: (a)提供多种微珠复合物,所述多种微珠复合物各自包含: (i)微珠载体;和 (ii)固定在所述微珠载体表面的特异性结合靶分子的第一抗体; 其中不同微珠复合物上固定的第一抗体各自特异性结合不同的靶分子; (b)将所述多种微珠复合物与待测样品孵育,使得不同微珠复合物上固定的第一抗体与其各自的靶分子结合; (c)将所述多种微珠复合物与待测样品分离,得到结合了不同靶分子的多种微珠复合物; (d)将结合了不同靶分子的多种微珠复合物与多种第一邻位探针和第二邻位探针对孵育,所述多种第一邻位探针和第二邻位探针对分别对应于不同的靶分子,其中所述第一邻位探针包含偶联至第一寡核苷酸的5’端的第二抗体,所述第二邻位探针包含偶联至第二寡核苷酸的3’端的第三抗体,每对第一邻位探针和第二邻位探针中的第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的序列在多种第一邻位探针和第二邻位探针对之间不同但所有第一寡核苷酸的3’端具有相同的第一衔接子序列和所有第二寡核苷酸的5’端具有相同的第二衔接子序列,并且每对第一邻位探针和第二邻位探针中的第二抗体和第三抗体各自结合与该第一邻位探针和第二邻位探针对所对应的靶分子上的不同表位,从而得到结合了多种第一邻位探针和第二邻位探针对的多种微珠复合物; (e)将步骤(d)的多种微珠复合物与夹板探针孵育,所述夹板探针由位于两端的短发夹和位于中间的杂交区组成,所述杂交区包含分别与第一衔接子序列和第二衔接子序列互补的互补序列,使得第一寡核苷酸的3’端和第二寡核苷酸的5’端通过与夹板探针杂交而相互邻近; 所述夹板探针两端的短发夹各自具有长度为4-6个碱基的环和长度为4-6个碱基对的反向互补双链; 所述夹板探针中间的杂交区为单链,其长度为8-12个碱基,其中与第一衔接子序列互补的互补序列的长度为4-6个碱基,和与第二衔接子序列互补的互补序列的长度为4-6个碱基; (f)将步骤(e)的多种微珠复合物与DNA连接酶孵育,使得邻近的第一寡核苷酸的3’端与第二寡核苷酸的5’端连接在一起; (g)将步骤(f)的多种微珠复合物与包含多种引物对的qPCR反应体系混匀,并进行qPCR反应,从而确定靶分子或相互作用的两种靶分子的存在。
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