农业农村部成都沼气科学研究所;四川省林业科学研究院(四川省林产工业研究设计所)王文国获国家专利权
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龙图腾网获悉农业农村部成都沼气科学研究所;四川省林业科学研究院(四川省林产工业研究设计所)申请的专利一种基于LC-MSMS定量厌氧发酵物与活性污泥中AHLs的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119804714B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-19发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510015334.4,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权一种基于LC-MSMS定量厌氧发酵物与活性污泥中AHLs的方法是由王文国;伍佩珂;郑渝川;吴斌;邓良伟设计研发完成,并于2025-01-06向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于LC-MSMS定量厌氧发酵物与活性污泥中AHLs的方法在说明书摘要公布了:本发明涉及分析技术领域,公开了一种基于LC‑MSMS定量厌氧发酵物与活性污泥中AHLs的方法。本发明通过将待测物顺次经提取、净化和萃取,得到待测液;然后标准品配置:设置合理的色谱条件和质谱条件,最后计算AHLs含量。该方法相比现有方法,提取更彻底、灵敏度更高、检出限更低、回收率高、操作简单等特点,适用于活性污泥和厌氧发酵物两种基质。为研究活性污泥和厌氧发酵物的AHLs的群感效应提供新的方法和思路,还能为污水处理厂和沼气工程提供全新的质控手段。
本发明授权一种基于LC-MSMS定量厌氧发酵物与活性污泥中AHLs的方法在权利要求书中公布了:1.一种基于LC-MSMS定量厌氧发酵物与活性污泥中AHLs的方法,其特征在于,包括如下步骤: 1样品处理:将待测物顺次经提取、净化和萃取,得到待测液; a提取:将待测物、乙腈、均质子和乙二胺四乙酸涡旋震荡后超声,得混合液;将混合液冷冻后与无水硫酸镁和柠檬酸二钠涡旋震荡后离心,完成提取,得到上清液;待测物、乙腈、乙二胺四乙酸、无水硫酸镁和柠檬酸二钠的用量比为2~10g:8~15mL:0.3~0.7g:4~6g:1~4g; b净化:取步骤a所得溶液的上清液,将其与除水剂和2种吸附剂混合后离心,取上清液顺次经氮气吹干和第一复溶,得到净化后溶液; 步骤b所述的上清液、除水剂、吸附剂1和吸附剂2的用量比为5~10mL:50~100mg:20~50mg:20~50mg; 所述除水剂为硫酸镁,吸附剂1为封尾C18吸附剂,吸附剂2为伯仲胺吸附剂; 步骤b所述第一复溶所用的试剂为乙酸钠溶液,乙酸钠溶液的浓度为15~30mmolL; c二次净化:将净化后溶液顺次经固相萃取、旋干和第二复溶,得到待测液; 所述固相萃取是将聚乙烯-二乙烯固相萃取柱安装在固相萃取仪中,使用5~10mL甲醇活化小柱,2~10mL超纯水平衡,15~30mmolL乙酸钠溶液洗涤,上样步骤b所得净化液,最后使用5mL×6甲醇异丙醇混合溶液洗脱,其中,甲醇和异丙醇的体积比5:1; 所述第二复溶所用的试剂为甲醇溶液,甲醇溶液的质量分数为20~40%; 2标准品配置:将C4-HSL、C6-HSL、C8-HSL、C10-HSL、C12-HSL、C14-HSL、3-oxo-C14-HSL、3-OH-C6-HSL、3-OH-C10-HSL配置成50mgL的9种AHLs混标储备液;建立质谱方法的混标浓度为50μgL,标准曲线浓度分别为0.001~300μgL; 所述AHLs混标储备液配置时所用溶剂为厌氧发酵物或好氧颗粒污泥经前处理所得的空白基质溶液,其空白基质通过多次验证不含待测物; 3色谱条件和质谱条件:所述质谱条件为:电喷雾离子源,气帘气30~50psi,碰撞气Medium,离子化电压4400~4600V,温度430~450℃,喷雾气50~55psi,辅助加热气55~60psi; 所述色谱条件为:流动相A:0.05%的甲酸水溶液,其中含0.1~0.3mM乙酸铵;流动相B:0.05%的甲酸的甲醇溶液,其中含0.1~0.3mM乙酸铵;色谱柱为双苯基柱;柱温为30~50℃;进样量为5~20μL; 4计算AHLs含量。
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