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龙图腾网获悉华南师范大学申请的专利基于CRISPR/Cas12顺式切割的核酸检测方法、试纸条、试剂盒及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN117904262B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-19发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202410070660.0，技术领域涉及：C12Q1/6844；该发明授权基于CRISPR/Cas12顺式切割的核酸检测方法、试纸条、试剂盒及应用是由周小明;林梅设计研发完成，并于2024-01-17向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于CRISPR/Cas12顺式切割的核酸检测方法、试纸条、试剂盒及应用在说明书摘要公布了：本发明提供一种基因检测试纸条，包括底板以及依序设置于底板并相连接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维素膜上设置有检测线和一条控制线，检测线靠近结合垫设置，控制线靠近吸水垫设置；检测线包被有用于与引物带有的修饰基团结合的捕获基团，控制线包被有用于与标记探针结合的质控探针，其中控制线包被的质控探针为将链霉亲和素溶液和质控探针混合液喷到控制线位置得到。本发明通过Cas蛋白crRNA复合体与目的序列的特异性切割反应产生待杂交粘性末端并与信号探针结合，在检测位点上检测信号探针的信号，提高检测的特异性和准确性。

本发明授权基于CRISPR/Cas12顺式切割的核酸检测方法、试纸条、试剂盒及应用在权利要求书中公布了：1.一种基于CRISPRCas12蛋白的核酸检测方法，所述方法为非诊断目的，其特征在于，包括以下步骤： 根据目的序列设计引物，并以待检测序列的基因组DNA为模板进行扩增，得到待检测序列的扩增片段序列；所述引物由第一引物和第二引物组成，第一引物的碱基序列为5’-ATGGATACCGAGGGAATAGC-3’；第二引物的碱基序列为5’-biotin-CTTACCGATGAAAATGATAC-3’； 制备信号探针：信号探针包括标记探针及与标记探针连接的纳米金，所述标记探针的碱基序列为5'-SH-AAAAATTACAGCCAGAACGTCGAGAACTCTCACAA-3'，标记探针的3’端为互补配对序列，所述互补配对序列用于与待杂交粘性末端互补配对，其中待杂交粘性末端为待检测序列的扩增片段序列被Cas12蛋白切割后掉落的带有粘性末端的PAM远端序列片段； 制备测试体系，并进行样品的检测： 将Cas12蛋白和crRNA混合形成Cas12蛋白crRNA复合体，将Cas12蛋白crRNA复合体与待检测序列的扩增片段序列混合；其中Cas12蛋白可顺式切割目的序列产生待杂交粘性末端；所述crRNA的序列为5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUCCUGCUGUUUGGAUAUUGUG-3’， 若待检测序列中存在目的序列，则Cas12蛋白crRNA复合体与待检测序列的扩增片段序列发生特异性切割反应，并与待检测序列的扩增片段序列结合形成Cas12蛋白crRNA待检测序列复合物，将Cas12蛋白crRNA待检测序列复合物体系作为测试体系，其中，所述Cas12蛋白crRNA待检测序列复合物体系包括Cas12蛋白crRNA待检测序列复合物和待杂交粘性末端，待杂交粘性末端为待检测序列的扩增片段序列被Cas12蛋白切割后掉落的带有粘性末端的PAM远端序列片段； 若待检测序列中不存在目的序列，则Cas12蛋白crRNA不与待检测序列的扩增片段序列发生特异性切割反应，测试体系包括Cas12蛋白crRNA和未被切割的待检测序列的扩增片段序列； 将测试体系与信号探针混合，若待检测序列中存在目的序列，则信号探针与作为测试体系的Cas12蛋白crRNA待检测序列复合物体系中的待杂交粘性末端结合；若待检测序列中不存在目的序列，则信号探针没有与测试体系发生反应； 在检测载体中进行检测，检测载体上设有用于捕获待杂交粘性末端的检测位点，在所述检测位点检测是否获取信号探针的信号，若检测到信号探针的信号，则待检测序列中含有目的序列，否则待检测序列中不含目的序列； 所述检测载体包被有质控位点和至少一个检测位点，质控位点上包被有与标记探针结合的质控探针，检测位点上包被有用于与修饰基团结合的物质，所述标记探针的中段与质控位点上的质控探针互补配对，所述检测载体为试纸条。

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