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龙图腾网获悉中国科学院南京土壤研究所申请的专利一种评价外源微生物在土壤中生长情况的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115261498B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-19发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210777730.7，技术领域涉及：C12Q1/689；该发明授权一种评价外源微生物在土壤中生长情况的方法是由吴宇澄;陈禹竹;何健;曾军;林先贵设计研发完成，并于2022-07-04向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种评价外源微生物在土壤中生长情况的方法在说明书摘要公布了：本发明提出了一种评价外源微生物在土壤中生长情况的方法，包括如下步骤：S1、于干燥土壤中添加外源微生物以及H2 18O进行土壤培养试验，采集土壤样品并提取土壤DNA；S2、分别以H2 16O和H2 18O配制用于培养外源微生物的液体培养基，收集所得外源微生物并提取DNA；S3、分别将S1中所得土壤DNA以及S2中菌体DNA样品溶解于氯化铯溶液中进行密度梯度离心，得不同DNA沿密度梯度的分布占比；S4、依据所得不同DNA的分布占比得土壤中外源微生物DNA的平均密度以实现外源微生物生长程度的定量评价；本发明针对外源微生物独特基因片段进行定量PCR分析，能够排除土壤中其他微生物的干扰，对外源微生物进行高度特异的分析。

本发明授权一种评价外源微生物在土壤中生长情况的方法在权利要求书中公布了：1.一种评价外源微生物在土壤中生长情况的方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、向干燥的土壤中添加外源微生物以及H2 18O进行土壤培养试验，采集土壤样品并提取土壤DNA； S2、分别以H2 16O和H2 18O配制用于培养外源微生物的液体培养基，收集所得外源微生物并提取DNA； S3、分别将S1中所得土壤DNA以及S2中16O及18O标记的菌体DNA样品溶解于氯化铯溶液中并进行超高速密度梯度离心，得不同DNA沿密度梯度的分布占比； S4、依据S3中所得不同DNA的分布占比得土壤中外源微生物DNA的平均密度，从而实现外源微生物生长程度的定量评价； 所述外源微生物为SphingomonaswittichiiDC-6，保藏于韩国农业微生物菌种保藏中心（KoreanAgriculturalCultureCollection,KACC），保藏编号为KACC16600， 于S1-S3中，以定量PCR方法对所得DNA样品进行基因定量，所述定量PCR方法分析步骤如下， 进行CndA基因的定量PCR测定，引物序列具体如下：CndAF：CATCCAGTGCCCCTATCACG；CndAR：AATCGCAGTCGAGATGCAGG； qPCR反应； 对照外标，计算获得各浮力密度层DNA中CndA基因的拷贝数，进行归一化计算后，得出各浮力密度层中CndA的相对分布； 相应S4中平均密度计算步骤如下， 采用加权平均法，计算18O-DNA、16O-DNA、Soil-DNA的平均浮力密度，公式为， ； 式中，为平均浮力密度；ρi为每一层的浮力密度；Ai指对应每层CndA基因的相对丰度； 计算土壤DNA中18O标记占比，公式为， 。

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