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龙图腾网获悉江苏省中国科学院植物研究所申请的专利一种续随子角鲨烯合酶敲除突变体材料的制备方法及用途获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119530281B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-22发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411663350.6，技术领域涉及：C12N15/82；该发明授权一种续随子角鲨烯合酶敲除突变体材料的制备方法及用途是由徐曙;陈锦;王茹媛;陈雨;李丕睿;赵万里;田梅;王碧;刘飞;李林蔚;王奇志;管福琴;冯煦设计研发完成，并于2024-11-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种续随子角鲨烯合酶敲除突变体材料的制备方法及用途在说明书摘要公布了：本发明公开了一种续随子角鲨烯合酶敲除突变体材料的制备方法及用途，属于植物基因工程领域。本发明以续随子的角鲨烯合酶基因作为靶标基因，首次在续随子中应用CRISPRCas9基因编辑系统，对角鲨烯合酶基因进行基因编辑敲除，获得了续随子角鲨烯合酶敲除突变体材料。通过本方法创制的续随子角鲨烯合酶敲除突变体材料，大环二萜产量显著提高，可降低大环二萜生产成本，具有广阔的应用前景。

本发明授权一种续随子角鲨烯合酶敲除突变体材料的制备方法及用途在权利要求书中公布了：1.续随子角鲨烯合酶敲除突变体材料在制备大环二萜类物质中的应用；所述的续随子角鲨烯合酶敲除突变体材料由以下方法制备而成： 1）采用无缝克隆GoldenGate技术获得包含编辑靶点的pNK2-Cas9-U6重组载体；具体连接反应体系为：10×ReactionBuffer：2µL，50ngµLpNK2-Cas9-U6：2µL，靶点产物：1µL，BioRunEco31Ⅰ：1µL，T4DNALigase：1µL，ddH2O：8µL；上述体系混匀后短暂离心并置于37℃孵育30min，然后65℃加热后放置冰上备用；其中，靶点序列的扩增引物序列为 SST1F：5’-cagtGGTCTCATGCAGGGAGCAATTCTGAAGCATC-3’， SST1R：5’-cagtGGTCTCAAAACGATGCTTCAGAATTGCTCCC-3’， 特异性靶点序列为：5’-GGGAGCAATTCTGAAGCATC-3’， 将连接产物转化大肠杆菌，测序结果检测到角鲨烯合酶靶点序列，将构建成功的pNK2-Cas9-U6基因编辑重组载体，通过热激法转至发根农杆菌MSU440，筛选获得阳性克隆，备用； 挑取续随子下胚轴外植体放入含有基因编辑重组载体的发根农杆菌的菌液中浸泡5min，无菌滤纸吸去多余菌液；超净台吹干表面菌液后，将下胚轴置于12MS固体培养基上进行共培养3天，将下胚轴换到含有200mgL头孢菌素的固体培养基中进行继代培养长出毛状根，并进行多次继代培养； 2）采用CTAB法提取续随子毛状根DNA，以续随子毛状根DNA为模版，SScxf和SScxr为引物进行PCR扩增，PCR产物进行测序；利用snapgene4.1.9分析测序结果，确定获得的基因编辑纯合敲除体，敲除类型为A碱基插入敲除突变；其中，突变体验证引物序列为： SScxf：5’-TGGACTCAATCCGTCGTTTTCG-3’， SScxr：5’-TGGTTCTTCGAGCCCTTGATACTG-3’； 所述的应用为：将敲除体毛状根放入12MS液体培养基中进行培养，培养条件为25℃、120rpm，15天后取毛状根材料，提取大环二萜类物质，鉴定成分和产量； 所述大环二萜类物质包括巨大戟醇和千金子二萜醇。

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