浙江工业大学柳志强获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江工业大学申请的专利一种提高7-DHC产量的酿酒酵母基因工程菌及其构建与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116179384B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-22发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310058515.6,技术领域涉及:C12N1/19;该发明授权一种提高7-DHC产量的酿酒酵母基因工程菌及其构建与应用是由柳志强;柯霞;潘子豪;杜宏斐;郑裕国设计研发完成,并于2023-01-18向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种提高7-DHC产量的酿酒酵母基因工程菌及其构建与应用在说明书摘要公布了:本发明涉及一种7‑DHC出胞分泌合成的酿酒酵母基因工程菌株,及其构建方法和应用。本发明构建了一株可向胞外高效转运7‑DHC的重组S.cerevisiae菌株sc13,利用其进行500mL摇瓶双相发酵时,7‑DHC总产量达到28.189mgg分泌量11.701mgg,相较于对照sc1菌株,7‑DHC总产量提升14.54倍,胞外总分泌量提升13.77倍,其中胞外7‑DHC的分泌产量占比41.51%。由本发明构建的重组菌株具有更强的外分泌能力和更高的产量,对7‑DHC的合成以及简化7‑DHC的分离提取提供了指导思路,具有广阔的应用前景。
本发明授权一种提高7-DHC产量的酿酒酵母基因工程菌及其构建与应用在权利要求书中公布了:1.一种构建提高7-DHC胞外分泌产量的酿酒酵母基因工程菌的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤: (1)敲除麦角固醇合成所需的C-22甾醇去饱和酶ERG5,并将PGAP-DHCR24-TCYC1片段整合到酿酒酵母CEN.PK2-1C基因组上的ERG5位点,构建得到的酿酒酵母命名为sc1菌株;其中,DHCR24序列如SEQIDNo.1所示; (2)将PGAL2-ERG1-TCYC1片段整合至sc1菌株基因组上,整合至GAL6位点,通过PGAL2启动子强化表达ERG1,构建得到酿酒酵母命名为sc2菌株; (3)将PGAL1-tHMG1-TCYC1片段整合至sc2菌株基因组上Ty1两端的δ序列中,通过PGAL1启动子强化表达tHMG1,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc3菌株;所述tHMG1的GeneID为42650; (4)将TTEF-TADH1-ERG8-PGAL10-PGAL1-ERG12-TCYC1片段整合至sc3菌株基因组上的GAL80位点,通过PGAL1,10双向启动子强化表达ERG8和ERG12,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc4菌株; (5)将TTEF-PGAL1-POS5-TCYC1片段整合至sc4菌株基因组上的MIG1位点,通过PGAL1启动子强化表达POS5,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc5菌株; (6)将TTEF-TADH1-ERG9-PGAL10-PGAL1-ERG20-TCYC1片段整合至sc5菌株基因组上的DPP1位点,通过PGAL1,10双向启动子强化表达ERG20和ERG9,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc6菌株; (7)将TTEF-PGAL1-ERG11-TCYC1片段整合至sc6菌株基因组上的GDH1位点,通过PGAL1启动子强化表达ERG11,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc7菌株; (8)将TTEF-TADH1-IDI1-PGAL10-PGAL1-ERG19-TCYC1片段整合至sc7菌株基因组上的ADH3位点,通过PGAL1,10双向启动子强化表达IDI1和ERG19,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc8菌株; (9)将PGAL1-DHCR24-TCYC1片段整合至sc8菌株基因组上的Ty3位点,通过PGAL1启动子异源表达DHCR24,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc9菌株; (10)将表达框PGAL1-ST1、PGAL1-PR1与线性化质粒pMD20-ERG6进行连接,得到同时过表达敲除片段H1-PGAL1-ST1-PGAL1-PR1-H2,将H1-PGAL1-ST1-PGAL1-PR1-H2导入sc9菌株基因组,构建得到敲除ERG6并过表达ST1和PR1转运蛋白的酿酒酵母菌株命名为sc13菌株,即所述提高7-DHC胞外分泌产量的酿酒酵母基因工程菌;所述ST1的Genebank序列号为XP_717917.2,所述PR1的Genebank序列号为XP_031058987.1。
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