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龙图腾网获悉广东海洋大学深圳研究院;深圳义海生物科技有限公司申请的专利一种尼罗罗非鱼CD36蛋白的真核表达载体的制备方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116064635B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-22发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211126859.8，技术领域涉及：C12N15/79；该发明授权一种尼罗罗非鱼CD36蛋白的真核表达载体的制备方法及应用是由胡惠玲;汪志文;夏洪丽;徐露茜;黄子威;鲁义善;夏立群设计研发完成，并于2022-09-16向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种尼罗罗非鱼CD36蛋白的真核表达载体的制备方法及应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种尼罗罗非鱼CD36蛋白的真核表达载体的制备方法及应用，提取尼罗罗非鱼肠道组织的RNA并合成cDNA；对尼罗罗非鱼CD36基因的编码序列片段进行PCR扩增得到尼罗罗非鱼CD36蛋白基因；然后构建尼罗罗非鱼CD36蛋白的真核表达载体pEGFP‑N1‑CD36。本发明制备的尼罗罗非鱼CD36蛋白的核苷酸序列的真核表达载体可用于制备提高罗非鱼抗链球菌免疫力的制品，该制品制备简单易操作，成本低；本发明通过在罗非鱼体内过表达尼罗罗非鱼CD36蛋白来增强罗非鱼抗链球菌的能力，使得感染无乳链球菌的罗非鱼的存活率提高60％。另外，通过在罗非鱼体内过表达尼罗罗非鱼CD36蛋白还可以降低罗非鱼体内的无乳链球菌载量，由此可以看出，本发明技术方案可以有效诱导罗非鱼机体细胞免疫。

本发明授权一种尼罗罗非鱼CD36蛋白的真核表达载体的制备方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种尼罗罗非鱼CD36蛋白的真核表达载体在制备提高罗非鱼抗无乳链球菌免疫制品中的应用，其特征在于，所述尼罗罗非鱼CD36蛋白的真核表达载体的制备方法，包括以下步骤： S1、提取尼罗罗非鱼肠道组织的RNA并合成cDNA； S2、以罗非鱼肠道cDNA为模板，利用合成的上游引物CD36-F:5’GAAGGAAGGCAACACACACCAC-3’与下游引物CD36-R:5’GATTCATTCATCCAAGGTTTGTTTT-3’对尼罗罗非鱼CD36基因的编码序列片段进行PCR扩增，PCR扩增反应结束后，将PCR扩增产物经凝胶电泳检测，获得单一目的条带大小的片段后，扩大扩增体系，电泳检测，PCR扩增产物纯化回收后连接pMD-18T载体，然后转化到Trans1-T1感受态细胞中，涂板挑取单菌落进行菌落PCR检测，得到尼罗罗非鱼CD36蛋白基因； S3、以含有尼罗罗非鱼CD36蛋白基因ORF片段的pMD-18T质粒即pMD-18T-CD36为模板，利用合成的上游引物pEGFP-N1-CD36-BamHI-F:5’-CGCGGATCCGACATGATCATTGAGAG-3’，下游引物pEGFP-N1-CD36-Xhol-R:5’-CCGCTCGAGTTGCTGTACTATCTCC-3’，进行PCR扩增；T4连接酶将PCR扩增目的片段与表达载体pEGFP-N1进行连接，转化到Trans1-T1感受态细胞中，涂板挑取单菌落进行菌落PCR检测，得到尼罗罗非鱼CD36蛋白的真核表达载体pEGFP-N1-CD36。

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