绵阳师范学院陈希文获国家专利权
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龙图腾网获悉绵阳师范学院申请的专利高纯度猪圆环病毒4型Cap蛋白的制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115477694B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-22发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210596791.3,技术领域涉及:C07K14/01;该发明授权高纯度猪圆环病毒4型Cap蛋白的制备方法是由陈希文;伍春平;尹苗;易浩楠;吴倩;赵洪设计研发完成,并于2022-05-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本高纯度猪圆环病毒4型Cap蛋白的制备方法在说明书摘要公布了:本发明涉及Cap38~228蛋白制备技术领域,尤其涉及高纯度猪圆环病毒4型Cap蛋白的制备方法。步骤包括S1.基于PCV4Cap蛋白和His‑SUMO标签的核苷酸序列,构建带双标签的原核表达载体pET‑28a‑His‑SUMO‑Cap38~228;S2.以pET‑28a‑His‑SUMO‑Cap38~228转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以IPTG进行诱导表达,并对表达条件进行优化,制备出目的蛋白His‑SUMO‑Cap38~228;同时经Ni‑NTA亲和层析柱对目的蛋白His‑SUMO‑Cap38~228纯化;S3.His‑SUMO‑Cap38~228经SUMO蛋白酶酶切后,再次用Ni‑NTA亲和层析柱去除His‑SUMO标签,获得Cap38~228。本发明可有效制备出高纯度的PCV4Cap38~228蛋白,其纯度大于95%,为血清学诊断、Cap蛋白的多抗或单抗以及亚单位疫苗研发提供了PCV4Cap38~228蛋白制备的技术基础。
本发明授权高纯度猪圆环病毒4型Cap蛋白的制备方法在权利要求书中公布了:1.高纯度猪圆环病毒4型Cap38~228蛋白的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: S1.基于PCV4Cap蛋白和His-SUMO标签的核苷酸序列,构建带双标签的原核表达载体pET-28a-His-SUMO-Cap38~228; 主要包括: 以PCV4GX2020FCG49毒株Cap蛋白核苷酸序列为基础,进行大肠杆菌密码子偏好性优化; 在Cap蛋白核苷酸的N端加入His-SUMO标签的核苷酸序列构建His-SUMO-Cap38~228目标序列; 在His-SUMO-Cap38~228目标序列的N端加入RBS序列及翻译起始信号,同时,在该序列5’和3’端分别加入XbaI和HindⅢ酶切位点; 将所述目标序列和pET-28a载体质粒分别经XbaI和HindⅢ双酶切后,进行胶回收双酶切产物,并使用T4DNA连接酶于16℃条件下连接过夜,制备出连接产物; 将连接产物转化DH5α感受态细胞,挑取单克隆菌落扩大培养,并利用质粒提取试剂盒提取重组质粒pET-28a-His-SUMO-Cap38~228,用XbaI和HindⅢ进行双酶切鉴定,并测序鉴定目标序列的正确插入,最终构建获得pET-28a-His-SUMO-Cap38~228表达载体; S2.以pET-28a-His-SUMO-Cap38~228转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以IPTG进行诱导表达,并对表达条件进行优化,制备出目的蛋白His-SUMO-Cap38~228;同时经Ni-NTA亲和层析柱对目的蛋白His-SUMO-Cap38~228纯化; 其中,对表达条件进行优化,包括:设置诱导时间为10h;设置诱导温度为20℃-30℃;设置IPTG浓度为0.2mmolL; S3.His-SUMO-Cap38~228经SUMO蛋白酶酶切后,再次用Ni-NTA亲和层析柱去除His-SUMO标签,获得Cap38~228。
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