买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

龙图腾网获悉上海药明生物医药有限公司申请的专利通过优化提高Bxb1酶的重组效率的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116004586B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211533245.1，技术领域涉及：C12N9/50；该发明授权通过优化提高Bxb1酶的重组效率的方法是由周晓元;秦毅;王卓智;顾继杰设计研发完成，并于2022-12-01向国家知识产权局提交的专利申请。

本通过优化提高Bxb1酶的重组效率的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种通过优化提高Bxb1酶的重组效率的方法，至少包括以下步骤：1基于Bxb1酶结构，挑选出影响Bxb1酶活性的突变位点；2对步骤1中挑选出来的突变位点进行定向突变获得不同的Bxb1酶突变体；3宿主细胞中建立荧光assay,对步骤2中不同的Bxb1酶突变体的重组效率进行评估。本发明通过定向突变和荧光assay评估的方式，成功获得了三个Bxb1酶的突变体，分别是Bxb1L82W，Bxb1D13R，Bxb1T15R。这三个Bxb1酶突变体与Bxb1酶野生型相比，介导的细胞系重组效率均有所提高。

本发明授权通过优化提高Bxb1酶的重组效率的方法在权利要求书中公布了：1.一种通过优化提高Bxb1酶的重组效率的方法，其特征在于，至少包括以下步骤： 1基于Bxb1酶结构，挑选出影响Bxb1酶活性的突变位点，所述突变位点为Bxb1D13R或Bxb1L82W； 2对步骤1中挑选出来的突变位点进行定向突变获得不同的Bxb1酶突变体，获得不同的Bxb1酶突变体的方法是：设计两条重叠引物，对野生型Bxb1酶的质粒进行环形PCR，得到Bxb1酶突变体质粒，并通过测序的方式来验证是否成功引入相应突变； 其中，所述野生型Bxb1酶的质粒的序列为SEQIDNO:1所示，两条重叠引物的序列为SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示，Bxb1酶D13R突变体质粒为SEQIDNO.4所示，供体质粒为SEQIDNO.5所示，Bxb1酶L82W突变体质粒为SEQIDNO.6所示； 3宿主细胞中建立荧光assay,对步骤2中不同的Bxb1酶突变体的重组效率进行评估，所述宿主细胞是CHO-S.ATTP-GFP.A12，CHO-S.ATTP-GFP.A12宿主细胞中有一个CMV启动子，attP重组位点，后面是GFP基因和PolyA，所述CHO-S.ATTP-GFP.A12宿主细胞能表达GFP绿色荧光蛋白基因而发绿光； 所述评估的方法是： 在所述宿主细胞中共转两个质粒，一个是Bxb1酶突变体质粒，另一个是供体质粒； 所述供体质粒的attB重组位点后是RFP红色荧光蛋白基因和polyA，然后是一个完整的BFP蓝色荧光蛋白基因表达框； 一起电转后，转染了的所述宿主细胞会表达所述BFP基因而发蓝光； 而只有成功重组的所述宿主细胞才会因为所述RFP基因前面有了启动子导致所述RFP基因得以正常表达而发红光； 重组效率％＝红色荧光细胞的比例蓝色荧光细胞的比例*100％。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人上海药明生物医药有限公司，其通讯地址为：201403 上海市奉贤区岚丰路1150号1幢2481室；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。