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龙图腾网获悉华中农业大学申请的专利一种基于CRISPR/Cas12a磁弛豫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115747306B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211095808.3，技术领域涉及：C12Q1/6825；该发明授权一种基于CRISPR/Cas12a磁弛豫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法是由陈翊平;魏露雨;王知龙设计研发完成，并于2022-09-08向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于CRISPR/Cas12a磁弛豫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及食品安全分析技术领域。本发明提供了一种基于CRISPRCas12a磁弛豫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：提取待检样品的基因组DNA；制备MNP‑ploy‑ALP并利用靶标激活的Cas12a对其进行反式切割；磁分离，上清液中加入磷酸化抗坏血酸酯；加入CuII、叠氮‑MNP偶联物和炔基‑MNP偶联物；磁分离，未结合的叠氮‑MNP偶联物作为信号探针，测定对应溶液的横向弛豫时间计算待测样品中的目标物含量。本发明无需进行核酸预扩增即可实现MRSA的高灵敏检测，避免了传统靶标核酸扩增所带来的交叉污染风险，为食品安全中MRSA的检测提供了高灵敏、准确、快速的方法。

本发明授权一种基于CRISPR/Cas12a磁弛豫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法在权利要求书中公布了：1.一种非诊断和治疗目的的基于CRISPRCas12a磁弛豫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，包括如下步骤： （1）提取待检样品的基因组DNA； （2）将Cas12a蛋白、crRNA和1×NEbufferr2.1混合，孵育得到crRNA-Cas12a复合物； （3）利用固相RCA制备MNP-ploy-ALP； （4）将MNP-ploy-ALP、待检样品的基因组DNA和RNAase抑制剂混合，得到物料1； （5）将crRNA-Cas12a复合物和物料1混合，孵育后磁分离，在上清液中加入磷酸化抗坏血酸酯，孵育得到物料2； （6）将物料2、CuII溶液、叠氮-MNP偶联物溶液和炔基-MNP偶联物溶液混合，孵育得到物料3； （7）将物料3磁分离，未结合的叠氮-MNP偶联物作为信号探针，通过测定对应溶液的横向弛豫时间可以计算出待测样品中的目标物含量； 步骤（3）中所述MNP-ploy-ALP的制备方法为： A、磁性纳米颗粒-链霉亲和素复合物的制备； B、DNA-ALP的制备：首先，将200µL浓度为10µM的thiol-DNA、10µL浓度为1M的PBS、5µL浓度为30mM的三2-羧乙基膦在37℃震荡反应60min，然后将混合物转移到Amicon-3K超滤管中，用缓冲液A在7500×g的条件下离心4次，每次30min，后重悬于200µL缓冲液A中；同时，将100µL浓度为10UmL的ALP与0.4mg的Sulfo-SMCC在室温下孵育60分钟；将混合物转移到Amicon-30K超滤管中，使用缓冲液A在7500×g的条件下离心4次，每次10min，后重悬在200µL的缓冲液A中，得到激活的ALP；将激活的ALP和thiol-DNA溶液充分混合，在4℃孵育2小时；为了去除未结合的thiol-DNA，将混合物在Amicon-30K超滤管中用缓冲液A离心5次，最后重悬在100µL缓冲液A中保存于-20℃； 步骤B中所述缓冲液A中含有0.1M的NaCl和0.1M的NaAc，pH为7.3； C、MNP-ploy-ALP复合物的制备：取浓度为10µM的biotin-DNA2µL、浓度为10µM的padlock探针2µL、超纯水13µL、10×ConnectorBuffer2µL在90℃下杂交5min，然后用PCR热循环系统以0.1℃s的梯度速度缓慢冷却至25℃；加入酶活力为2,000,000UmL的T4DNA连接酶1µL，室温孵育2h,65℃水浴将酶灭活，得到混合液；取20µL混合液与100µLMNP-SA在室温下混合60min，进行生物素-链霉亲和素反应；用PBST洗涤3次后，将复合物分散在100μL的超纯水中；随后加入浓度为10mM的dNTPs2µL、酶活力为10,000UmL的phi29DNA聚合酶0.5µL、超纯水67.5µL、10×phi29缓冲液20µL，在37℃下反应45min，进行RCA反应；用TBST缓冲液洗涤4次，在TBS缓冲液100µL中分散；加入20μLDNA-ALP，室温反应30min，最后用TBST洗涤4次，去除未结合的DNA-ALP，在100μL的TBS缓冲液中重悬；得到MNP-ploy-ALP； 步骤（6）中所述叠氮-MNP偶联物溶液为叠氮-MNP30偶联物溶液，所述炔基-MNP偶联物溶液为炔基-MNP1000偶联物； 步骤（7）中所述未结合的叠氮-MNP偶联物为未结合的叠氮-MNP30偶联物。

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