温州医科大学吴志刚获国家专利权
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龙图腾网获悉温州医科大学申请的专利温郁金凝集素高纯品、制备方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115304663B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-26发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202111579470.4,技术领域涉及:C07K14/42;该发明授权温郁金凝集素高纯品、制备方法及应用是由吴志刚;姜程曦;张丽萍;费璇;余佳兴设计研发完成,并于2021-12-22向国家知识产权局提交的专利申请。
本温郁金凝集素高纯品、制备方法及应用在说明书摘要公布了:本发明提供温郁金凝集素高纯品的制备方法及应用,其特征在于具有以下步骤,①样品处理:温郁金根茎鲜品去皮、粉碎,Tris‑HCl缓冲液低温浸提;②粗品制备:固体硫酸铵沉淀,透析;③半成品制备:粗品使用纤维素阴离子交换色谱DEAE‑52柱分离纯化;④纯品制备:半成品使用葡聚糖凝胶色谱SephadexG‑75柱分离纯化,得温郁金高纯品凝集素WLT。本发明制备的温郁金纯品凝集素分子量约为28KDa,属甘露糖结合型的天然蛋白,具有广谱抗肿瘤活性。因而,本发明制备的凝集素产品可作为抗肿瘤药物研发的新药源,有利于加速新颖性天然蛋白药物的开发。
本发明授权温郁金凝集素高纯品、制备方法及应用在权利要求书中公布了:1.温郁金凝集素高纯品的制备方法,其特征在于:包括以下步骤: S1:样品处理:将新鲜的温郁金根茎洗净、去皮、粉碎,加入Tris-HCl缓冲液,浸提12~16h,离心,收集上清液; S2:粗品制备:在步骤S1得到的上清液中加入固体硫酸铵并充分搅拌至饱和度为60~70%,静置10~12h,离心,沉淀物Tirs-HCl缓冲液溶解,透析,冷冻干燥得温郁金凝集素粗品; S3:半成品制备:将步骤S2得到的温郁金凝集素粗品加入Tris-HCl缓冲液溶解,用DEAE-52纤维素阴离子交换柱分离纯化,使用含0.2~1.0mollNaCl的Tris-HCl缓冲液梯度洗脱,合并收集具凝血活性的蛋白峰,冷冻干燥得温郁金凝集素半成品; S4:高纯品制备:将步骤S3得到的温郁金凝集素半成品加入Tris-HCl缓冲液溶解,用葡聚糖凝胶SephadexG-75柱分离纯化,使用含0.2~1.0mollNaCl的Tris-HCl缓冲液梯度洗脱并收集具凝血活性蛋白峰的试管液,合并,冷冻干燥得温郁金凝集素高纯品; 步骤S3中凝集素粗品和步骤S4中的半成品均使用重量体积为1:8~15的料液比的Tris-HCl缓冲液进行溶解; 步骤S3和S4中梯度洗脱过程中,包含采用紫外分光光度计实时监测流出液280nm处的吸光值的步骤,以此确定洗脱液的蛋白峰,直至流出液吸光值趋于正常值为止; 步骤S3和S4中梯度洗脱过程中,蠕动泵控制流速为0.5mlmin。
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