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龙图腾网获悉良渚实验室申请的专利一种非病毒依赖的工程化诱导性多能干细胞及其制备方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120060155B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-09发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510519104.1，技术领域涉及：C12N5/10；该发明授权一种非病毒依赖的工程化诱导性多能干细胞及其制备方法和应用是由陈莹莹;张进;孔娜设计研发完成，并于2025-04-24向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种非病毒依赖的工程化诱导性多能干细胞及其制备方法和应用在说明书摘要公布了：本发明属于细胞免疫技术领域，涉及一种非病毒依赖的工程化诱导性多能干细胞及其制备方法和应用。所述工程化诱导性多能干细胞的基因组上SIRPA基因中插入有嵌合抗原受体的编码基因。本发明以SIRPA基因位置定点插入方式编辑iPSC细胞，实现同时敲除SIRPA和整合外源性嵌合抗原受体CAR，可进一步诱导分化为CAR‑iMac，使其向单核巨噬细胞肿瘤靶向性细胞分化，增强其吞噬能力，进一步递呈肿瘤抗原，改善肿瘤免疫微环境，增强抗肿瘤免疫，有效克服了从人体内直接提取天然巨噬细胞相应的问题，降低生产成本和时间成本，利于临床应用，此外，利用非病毒介导的基因编辑手段，显著改善遗传沉默现象。

本发明授权一种非病毒依赖的工程化诱导性多能干细胞及其制备方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种制备嵌合抗原受体巨噬细胞的方法，其特征在于，所述制备方法包括： 诱导培养非病毒依赖的工程化诱导性多能干细胞，得到所述嵌合抗原受体巨噬细胞； 所述诱导培养的培养基含有细胞因子；所述细胞因子包括BMP4、bFGF、VEGF、SCF或抑制剂中至少一种； 所述工程化诱导性多能干细胞的基因组上SIRPA基因的6号外显子中反向插入有嵌合抗原受体的编码基因； 所述嵌合抗原受体包括前导肽、胞外识别区、铰链区和跨膜胞内信号区、共刺激因子、信号传递区和模式识别受体； 所述前导肽、铰链区、跨膜胞内信号区、共刺激因子、信号传递区和模式识别受体的氨基酸序列分别如SEQIDNO.4，SEQIDNO.6-SEQIDNO.10所示； 所述胞外识别区包括抗体，所述抗体包括抗GPC3抗体，所述抗GPC3抗体的氨基酸序列包括SEQIDNO.5所示的序列； 所述嵌合抗原受体的编码基因的核酸序列如SEQIDNO.11所示； 所述工程化诱导性多能干细胞的制备方法包括： 将嵌合抗原受体的编码基因定点插入诱导性多能干细胞基因组上SIRPA基因中，得到所述工程化诱导性多能干细胞； 所述定点插入的方法为CRISPRCas9法； 所述CRISPRCas9法的sgRNA的核酸序列如SEQIDNO.1所示； 所述CRISPRCas9法的同源重组模版的同源臂的核酸序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。

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