上海海洋大学徐田军获国家专利权
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龙图腾网获悉上海海洋大学申请的专利一种鱼类病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗及其制备方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119770635B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510290007.X,技术领域涉及:A61K39/12;该发明授权一种鱼类病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗及其制备方法和应用是由徐田军;孙悦娜;周学锋;郑伟伟;高云航设计研发完成,并于2025-03-12向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种鱼类病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗及其制备方法和应用在说明书摘要公布了:本发明涉及生物医药技术领域,具体公开了一种鱼类病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗及其制备方法和应用。本发明中利用复制缺陷型重组腺病毒载体,制备病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗的方法,具体步骤包括神经坏死病毒CP基因克隆、构建带有目的基因的Pshuttle‑CMV‑ECMV载体、获得重组腺病毒质粒、筛选获得重组腺病毒和制备重组腺病毒疫苗。本发明制备得到的鱼类病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗能够通过浸泡方式在幼鱼期进行免疫预防NNV病毒感染,疫苗稳定性好,且经动物安全性试验证明疫苗安全、有效,临床使用便利简单,具有较好的市场应用前景。
本发明授权一种鱼类病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗及其制备方法和应用在权利要求书中公布了:1.一种石斑鱼病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗,其特征在于:所述重组腺病毒疫苗的抗原蛋白为病毒性神经坏死病毒CP基因,所述重组腺病毒疫苗的抗原的核苷酸序列为SEQIDNO:1所示,所述石斑鱼病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗按照如下步骤制备: (1)神经坏死病毒CP基因克隆:针对病毒NNV-CP基因序列进行分析设计引物NNV-CP-F和引物NNV-CP-R以NNV病毒的cDNA为模板进行扩增,NNV-CP-F和引物NNV-CP-R分别加入了Pshuttle-CMV-ECMV载体的同源序列和酶切位点; (2)构建带有NNV-CP的Pshuttle-CMV-ECMV载体:将克隆得到的NNV-CP基因,通过同源重组技术克隆到Pshuttle-CMV-ECMV载体,构建出带有NNV-CP基因的Pshuttle-CMV-ECMV载体,命名为Pshuttle-CMV-ECMVNNV-CP; (3)获得重组腺病毒质粒:将获得的重组腺病毒载体Pshuttle-CMV-ECMVNNV-CP与PAd-easy-1载体在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,构建出重组腺病毒质粒; (4)筛选获得重组腺病毒:将筛选得到的重组腺病毒阳性质粒经PacⅠ酶切后用于转染HEK293细胞,获得带有NNV-CP基因的重组腺病毒; (5)制备病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗:将收获的带有NNV-CP基因的重组腺病毒传代后,对目的抗原蛋白的表达进行检测,将检测后蛋白能够表达的重组腺病毒接种于HEK293细胞进行多次传代、反复冻融并测定病毒滴度,取高滴度的重组腺病毒制备得到病毒性神经坏死症重组腺病毒疫苗。
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