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中国兽医药品监察所王秀丽获国家专利权

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龙图腾网获悉中国兽医药品监察所申请的专利一种高特异性的鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌平板凝集抗原制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120064644B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510220548.5,技术领域涉及:C12N1/20;该发明授权一种高特异性的鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌平板凝集抗原制备方法是由王秀丽;刘元杰;张媛;李俊平;李建设计研发完成,并于2025-02-26向国家知识产权局提交的专利申请。

一种高特异性的鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌平板凝集抗原制备方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种高特异性的鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌平板凝集抗原制备方法,将鸡白痢沙门氏菌C79‑1和C79‑7株分别复苏后制成种子液,接种适宜培养基,按照特定的工艺发酵培养,灭活后离心收集菌体,121℃高压2h并多次洗涤后去除易与大肠杆菌或其他环境中常在的肠杆菌科细菌发生交叉反应的蛋白抗原组分,将C79‑1株和C79‑7株调整至适宜的菌浓度,加入Tween‑20、结晶紫和甘油,充分匀浆获得鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌平板凝集抗原。该抗原特异性更高,用于鸡白痢净化检测时更精准;按照该酵工艺的细菌产率为普通发酵的4倍,为固体培养的2倍,无需乙醇沉淀,生产成本更低;加入Tween‑20,增加抗原表面张力,解决使用时难以涂布均匀的问题,为鸡白痢的净化提供新的更优的诊断试剂。

本发明授权一种高特异性的鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌平板凝集抗原制备方法在权利要求书中公布了:1.一种高特异性的鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌平板凝集抗原制备方法,其特征在于:包括以下步骤: (1)一级种子的制备 采用标准型鸡白痢沙门氏菌C79-1株和变异型鸡白痢沙门氏菌C79-7株分别接种普通琼脂平板培养;选择通琼脂平板上菌落接种普通琼脂斜面培养基培养,获得一级种子;C79-1株和C79-7株的保藏编号分别为CVCC79201和CVCC79201; (2)二级种子的繁殖 一级种子接种普通肉汤培养基培养获得二级种子; (3)抗原高密度发酵培养 二级种子在发酵罐中发酵培养,收获菌液,加入终浓度为0.2%的甲醛灭活12h,收获菌液; (4)菌体处理 将步骤(3)中收获的菌液以8000rpm离心20min,收集沉淀,用0.01molL,pH值7.0~7.2的PBS重悬,置于121℃高压2h,以8000rpm离心20min,收集沉淀,用0.01molL,pH值7.0~7.2的PBS洗涤,至上清液澄清,用含2%甲醛的0.01molL,pH值7.0~7.2的PBS将菌体重悬,调整菌液浓度为5×1010CFUml; (5)抗原的配制 将标准型鸡白痢沙门氏菌C79-1株和变异型鸡白痢沙门氏菌C79-7株的菌悬液分别稀释不同浓度,分别以50ul与等量含0.5IU的标准型变异型阳性血清国家标准品进行平板凝集试验,以出现不低于50%凝集的菌液浓度,作为配制抗原的浓度; 所述步骤(3)中按照发酵液总量2%的比例接种二级种子在含普通肉汤培养基的发酵罐发酵培养,37℃培养,发酵期间控制溶氧40%,用氨水控制pH值在7.0~8.0,发酵12h后按照发酵液体积5%的比例加入40%葡萄糖,之后每4h补加1次葡萄糖,发酵至pH值开始上升时,加入终浓度为0.2%的甲醛灭活12h,收获菌液。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人中国兽医药品监察所,其通讯地址为:100086 北京市海淀区中关村南大街8号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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